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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » EcoRI和BglII这一对内切酶效率如何
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

[求助] EcoRI和BglII这一对内切酶效率如何 已有2人参与

求助：1，BglII内切酶酶切效率如何
           2，EcoRI和BglII这一对内切酶效率如何
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
1楼 2014-02-24 17:48:12
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-24 21:13:49
都是不错的酶，用过多次，没遇到问题
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2楼2014-02-24 18:24:38
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 21:13:56
tiankong很蓝: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-02-25 09:37:35
...
    首先得看公司了，不同公司有些酶的活性、Buffer都不一样。
    EcoRI没得说，那个公司的都很好使，就是注意不要出现Star activity就行，这个酶还是比较容易造成这个结果的。
    以NEB公司来看，EcoRI和BglII主要是不同的Buffer造成的不兼容，用NEB3.1 Buffer使BglII的活性最大，但降低EcoRI活性50%会比较合适。
    其他公司的不太清楚，如果觉得不可以的话，分步单酶切都是可行的
    祝实验顺利
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Let God do with it as He wills
3楼2014-02-24 18:26:47
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-24 18:26:47
...
    首先得看公司了，不同公司有些酶的活性、Buffer都不一样。
    EcoRI没得说，那个公司的都很好使，就是注意不要出现Star activity就行，这个酶还是比较容易造成这个结果的。
    以NEB公司来看，EcoRI和 ...

请问您一下，在酶切过程中我要如何才能避免EcoRI的Star活性呢？谢谢
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
4楼2014-02-24 19:18:51
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2014-02-24 18:24:38
都是不错的酶，用过多次，没遇到问题

好的，谢谢
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
5楼2014-02-24 19:24:14
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 21:14:07
引用回帖:
4楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2014-02-24 19:18:51
请问您一下，在酶切过程中我要如何才能避免EcoRI的Star活性呢？谢谢...

1. 用正确的Buffer，不正确的Buffer会有不正确的离子强度
2. 酶切时间不要过长，请遵照说明书，Thermo的FD酶一般要求30min，而NEB好像不要超过3 hr吧
3. 酶用量不要超过总体积10%，也就是指甘油含量不要超过5%
其他就没什么了
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Let God do with it as He wills
6楼2014-02-24 19:29:38
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yugari_nagi

铁虫 (初入文坛)
避免星星活性就买NEB的HF酶咯 EcoRI是有HF版本的
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7楼2014-02-27 16:54:19
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