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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » [求助]细胞培养时有许多呈圆形
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w7363387

铜虫 (初入文坛)

[求助] [求助]细胞培养时有许多呈圆形 已有3人参与

本人是细胞培养的新手，在培养鼠成纤维细胞时发现许多细胞并没有呈梭型，而是呈圆形存在且未悬浮。求教高手我该如何处理啊。
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1楼 2014-02-24 12:39:08
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢参与 2014-02-25 08:18:25
成纤维细胞的原代培养可用酶消化法或组织块法，其中组织块法又因其操作简便、条件易于控制而应用更为普遍。通常，以酶消化法获得的成纤维细胞悬液在接种后5～10min即可见细胞以伪足初期附着，与底物形成一些接触点；然后细胞逐渐呈放射状伸展，胞体的中心部分亦随之变扁平；最快者大约在接种后30min，细胞贴附底物即较为完全，呈现成纤维细胞的形态。采用组织块法则大约在接种后2～3天到1周左右，在接种的皮肤组织块周围长出细胞。待细胞融合成片，铺满培养容器底壁大部分时即可进行传代。一般都采用胰蛋白酶(trypsin)，将成纤维细胞从底壁消化下来后分瓶作传代培养。成纤维细胞在体外培养条件下能保持良好的分裂增殖能力。细胞分裂时变为球形；分裂后又平铺在附着物的表面成为有突起的扁平细胞。体外培养的成纤维细胞，其生命期限与物种等因素有关。
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2楼2014-02-24 14:15:07
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w7363387

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yipan at 2014-02-24 14:15:07
成纤维细胞的原代培养可用酶消化法或组织块法，其中组织块法又因其操作简便、条件易于控制而应用更为普遍。通常，以酶消化法获得的成纤维细胞悬液在接种后5～10min即可见细胞以伪足初期附着，与底物形成一些接触点； ...

那你认为我在培养时圆形细胞占50%左右是正常情况吗？
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3楼2014-02-25 07:59:18
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yipan

铜虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by w7363387 at 2014-02-25 07:59:18
那你认为我在培养时圆形细胞占50%左右是正常情况吗？...

百分之五十可以转瓶了。
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4楼2014-02-25 09:09:21
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
w7363387: 金币+1, ★有帮助 2014-02-25 11:09:55
刚接种细胞前几个小时只有部分舒展开；细胞分裂时是圆形而且不悬浮。
如果是培养不好的话，细胞会悬浮。
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5楼2014-02-25 10:39:19
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ifyousee

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先有一些基本信息非常重要，就是你培养的细胞正常周期是怎么的？用的是什么培养液？在培养过程中温度、血清、培养瓶、培养液等等的条件有没有改变过？
细胞状态不好会出现细胞变圆或是贴壁细胞空泡增多的情况。而且如果50%的细胞都是这种状态的话这瓶细胞如果不是特别珍贵就丢了重新养过吧。细胞状态一变差几乎很难变回去的。
我养了6、7年的细胞，擅长各种原代培养、建立细胞系，我会乱说么。
具体的一两句话说不清楚。如果问题依然存在的话加我Q 429108796
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6楼2014-02-25 12:38:24
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