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三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-02-24 20:02:15
衰亡期和对数期破胞现象会不一样吗?...

我也不知道具体的依据,只是我做实验时,用衰亡的细胞离心后,ep管底会有一点黑色。但是对数生长期的不会有。
我不会!
11楼2014-02-24 22:28:25
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lingbi

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飘逸的云: 金币+2, 有帮助 2014-02-25 09:04:07
超声破碎要考虑探头的粗细、处理样品的量、容器的大小等,摸索一下条件,一般400W的用功率70-80%  间隔时间延长些,破20min 镜检看看破的怎么样。或者小功率破的时间延长。破黑了,有两个原因,一个是冰浴时间不够,热交换时间段,一个是功率太大,时间长,碳化了,降低功率
12楼2014-02-24 22:29:39
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by lingbi at 2014-02-24 22:29:39
超声破碎要考虑探头的粗细、处理样品的量、容器的大小等,摸索一下条件,一般400W的用功率70-80%  间隔时间延长些,破20min 镜检看看破的怎么样。或者小功率破的时间延长。破黑了,有两个原因,一个是冰浴时间不够, ...

谢谢指点!请问你做过酵母破胞实验吗?能不能具体提供一些方法指导一下
13楼2014-02-25 09:03:57
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

反复冻融好像也可以。
14楼2014-02-25 11:16:03
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-25 11:16:03
反复冻融好像也可以。

反复冻融效果应该不好吧
15楼2014-02-25 11:43:24
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-02-25 11:43:24
反复冻融效果应该不好吧...

恩  好像是   实验室的师兄搞过   蛋白不多
16楼2014-02-25 15:29:59
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lingbi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-02-25 09:03:57
谢谢指点!请问你做过酵母破胞实验吗?能不能具体提供一些方法指导一下...

我做大肠杆菌超声破碎的,酵母表达多是分泌的,一不用。
但是既然你要用这个方法就按照细菌破碎的原则来试试,功率别太高,随时留样镜检破碎情况。破黑了原因都一样。
我的蛋白是包涵体,破碎时间长也不怕,你的是胞内表达吧,破碎久了怕蛋白有损失,所以也要随时留样检测,经过几轮尝试最后确定最佳破菌时间。
希望建议对你有用。
17楼2014-02-26 12:51:50
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冰艺于欣然

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-23 18:59:34
木有问题的,如果酵母表达的蛋白不需要活性检测什么的,600W木有问题的。如果需要后续的活性检测,建议功率适当降低 400w可以了。超声后离心有黑色物质也很正常,不用担心。至于超声的时间,看你超声的菌液量。一般 ...

为什么我超了很久很久还是一点都不清呢
18楼2014-11-24 09:41:52
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朱多龙

木虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 冰艺于欣然 at 2014-11-24 09:41:52
为什么我超了很久很久还是一点都不清呢...

超声很久还不清?是不是超声的体积太小,或者探头碰壁了啊?还是菌体太浓了?超声后离心看一看吧。
19楼2014-11-24 20:53:05
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柳剑一1989

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我现在和你当时的情况差不多,整个实验室就我自己在做。我询问得知酸洗玻璃珠法提取酵母DNA比较好,但不知道怎么操作。能不能把操作步骤给说一下啊?????万分感谢
20楼2015-05-10 12:57:00
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