【答案】应助回帖

我不会！

11楼2014-02-24 22:28:25

lingbi

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飘逸的云: 金币+2, ★有帮助 2014-02-25 09:04:07

超声破碎要考虑探头的粗细、处理样品的量、容器的大小等，摸索一下条件，一般400W的用功率70-80% 间隔时间延长些，破20min 镜检看看破的怎么样。或者小功率破的时间延长。破黑了，有两个原因，一个是冰浴时间不够，热交换时间段，一个是功率太大，时间长，碳化了，降低功率

12楼2014-02-24 22:29:39

飘逸的云

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12楼: Originally posted by lingbi at 2014-02-24 22:29:39
超声破碎要考虑探头的粗细、处理样品的量、容器的大小等，摸索一下条件，一般400W的用功率70-80% 间隔时间延长些，破20min 镜检看看破的怎么样。或者小功率破的时间延长。破黑了，有两个原因，一个是冰浴时间不够， ...

谢谢指点！请问你做过酵母破胞实验吗？能不能具体提供一些方法指导一下

13楼2014-02-25 09:03:57

鬼羽帝魂

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反复冻融好像也可以。

14楼2014-02-25 11:16:03

飘逸的云

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14楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-25 11:16:03
反复冻融好像也可以。

反复冻融效果应该不好吧

15楼2014-02-25 11:43:24

鬼羽帝魂

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15楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-02-25 11:43:24
反复冻融效果应该不好吧...

恩好像是实验室的师兄搞过蛋白不多

16楼2014-02-25 15:29:59

lingbi

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13楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2014-02-25 09:03:57
谢谢指点！请问你做过酵母破胞实验吗？能不能具体提供一些方法指导一下

...

我做大肠杆菌超声破碎的，酵母表达多是分泌的，一不用。
但是既然你要用这个方法就按照细菌破碎的原则来试试，功率别太高，随时留样镜检破碎情况。破黑了原因都一样。
我的蛋白是包涵体，破碎时间长也不怕，你的是胞内表达吧，破碎久了怕蛋白有损失，所以也要随时留样检测，经过几轮尝试最后确定最佳破菌时间。
希望建议对你有用。

17楼2014-02-26 12:51:50

冰艺于欣然

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3楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-23 18:59:34
木有问题的，如果酵母表达的蛋白不需要活性检测什么的，600W木有问题的。如果需要后续的活性检测，建议功率适当降低 400w可以了。超声后离心有黑色物质也很正常，不用担心。至于超声的时间，看你超声的菌液量。一般 ...

为什么我超了很久很久还是一点都不清呢

18楼2014-11-24 09:41:52