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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 6993.4
散金: 181
红花: 3
帖子: 412
在线: 92.7小时
虫号: 2628224
注册: 2013-09-01
性别: GG
专业: 作物分子育种

[求助] 关于PCR扩不出的问题，求大神解答已有5人参与

大家好：我现在PCR的时候遇到了一个问题，我根据小麦转录组测序的结果，想设计几对引物做荧光定量，扩增长度大约100bp左右。但是，我想先用基因组DNA，用普通的PCR仪摸一下条件，却怎么也扩不出目的带（只有模糊的引物带），用touchdown程序也不行。用cDNA直接荧光定量更是定不出来，可我设计引物的时候都尽量避开了引物二聚体或者错配，这是咋回事啊？求大神解答，着急啊

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1楼2014-01-24 13:04:57

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冰封之real

银虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lwk5716: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-01-28 15:54:23

既然是小麦基因组，那LZ就得考虑内含子的问题，要试也不能拿基因组试，而是用cDNA进行普通PCR，如果能得到所需条带，再上荧光定量PCR。如果得不到，那就是引物有问题（也有可能是cDNA有问题，不过这个可能性不大）

赞一下(1人)

8楼2014-01-26 09:29:32

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