| 查看: 4512 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
meimei23金虫 (著名写手)
|
[求助]
蔗糖致死双交换筛选已有3人参与
|
|
| 求助各位大神：我做棒杆菌的基因敲除，有6个基因都卡双交换子筛选这一步了，就是在单交换验证成功之后，挑菌进行蔗糖致死双交换，在蔗糖平板长出单菌落，验证时用我的敲除臂引物检测的时候能检测到目的基因缺失（只能扩到我的同源臂），但用设计的目的基因（待敲除的基因）内部引物去扩，又能扩到片段，很是郁闷！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有155人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
meimei23
金虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 281.8
- 散金: 216
- 帖子: 1001
- 在线: 412.9小时
- 虫号: 1006436
- 注册: 2010-04-26
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
11楼2014-04-20 21:38:25
zhouzejun202
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 506.5
- 红花: 2
- 帖子: 56
- 在线: 111.9小时
- 虫号: 1331425
- 注册: 2011-06-26
- 专业: 细胞物质运输
2楼2014-01-19 20:26:59
朱多龙
木虫 (小有名气)
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 4389.8
- 红花: 10
- 帖子: 221
- 在线: 389.2小时
- 虫号: 2055828
- 注册: 2012-10-12
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
meimei23: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-20 00:02:12
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 08:33:02
感谢参与，应助指数 +1
meimei23: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-20 00:02:12
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 08:33:02
| 你所谓的只能检测到你的同源臂，不知你是怎么设计验证引物的。验证引物最直接的就是在你将要敲出的基因两端设计一对引物，用敲除菌及原始菌基因组做PCR，如果敲除了必然会比原始菌株扩增出来的短，这是最直接的证据。即使基因多拷贝了，也会出现与原始菌一样的条带，同时会有变短的条带。基因内部引物的验证只能用来自己检测用，在自己的paper中根本没有说服力的。请认真重复一下你的实验，还有敲除菌是否被原始菌或回复突变菌污染了。 |
3楼2014-01-19 21:05:25
朱多龙
木虫 (小有名气)
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 4389.8
- 红花: 10
- 帖子: 221
- 在线: 389.2小时
- 虫号: 2055828
- 注册: 2012-10-12
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2014-01-19 21:13:02