应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光PCR曲线图求助
51/1返回列表
查看: 1148  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

[求助] 荧光PCR曲线图求助 已有1人参与

最近做了个细菌的荧光PCR检测，实验数据图如下，
荧光PCR曲线图求助
1.jpg
我针对该细菌的23SrDNA 设计了引物探针，但从实验结果来看是阴性，没有扩增出我需要的序列，我想知道除了我的引物和探针出现了错误，我的反应体系和反应条件出现错误了会不会导致上面的曲线？

[ Last edited by a3200649 on 2014-1-17 at 23:07 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
希望大家多多交流
1楼 2014-01-17 23:01:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a3200649 at 2014-01-18 10:06:19
我没有阳性对照，还没做标准品。我提取细菌菌落基因组的DNA，然后模板是gDNA,以前做普通pcr然后电泳，能看到好几条条带，这次做的荧光PCR我就想看看我设计的引物探针能不能把需要的序列扩出来（我需要的序列是细菌 ...

如果做普通PCR就有好几条带，说明引物的特异性不好或者是PCR退火温度不合适，做定量需要引物的特异性非常，如果引物达不到要求，需要重新设计。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-18 10:16:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-18 16:10:40
你这是没有P出来，所以荧光值也很低。你的PCR是否设立了阳性对照？模板是cDNA吗？你的引物用gDNA为模板做普通PCR是否能P出来？
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-18 02:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-18 02:08:48
你这是没有P出来，所以荧光值也很低。你的PCR是否设立了阳性对照？模板是cDNA吗？你的引物用gDNA为模板做普通PCR是否能P出来？

我没有阳性对照，还没做标准品。我提取细菌菌落基因组的DNA，然后模板是gDNA,以前做普通pcr然后电泳，能看到好几条条带，这次做的荧光PCR我就想看看我设计的引物探针能不能把需要的序列扩出来（我需要的序列是细菌23SrDNA,探针序列也是根据其设计的）
赞一下 回复此楼
希望大家多多交流
3楼2014-01-18 10:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 15:33 by KM5EcsNQRBPn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 15:18 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 14:33 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭