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CO-IP还是pull down? 已有3人参与
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本人新手求助，拟做蛋白质共同作用的实验 我现在理解co-ip是将细胞裂解获得总蛋白，然后用目标蛋白（细胞本身表达的）的抗体将目标蛋白和其共同作用蛋白共沉淀下来 而 pull down是将目标蛋白与GST标签融合表达，再用带GST的重组表达的目标蛋白（细胞不一定表达）与细胞总蛋白进行反应 然后通过GST将目标蛋白及其共同作用蛋白分离出来？不知我的理解是否正确 我现在的实验是 我有目标蛋白的重组表达蛋白（靶细胞不表达，可能与靶细胞内的某蛋白有共同作用），不带GST标签，还有目标蛋白的高亲和力的抗体。我能否将靶细胞裂解获得总蛋白，然后加入我重组表达的目标蛋白进行反应 然后用目标蛋白的高亲和力抗体将目标蛋白和共同作用蛋白沉淀下来？这种方法是否可行？如果可行这算是co-ip么？还有这种情况要如何设计对照组的实验? |
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2楼2014-01-16 23:30:53
3楼2014-01-16 23:55:17
4楼2014-01-17 10:54:59
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
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专家经验: +24 - BioEPI: 1
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24339.7
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- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
5楼2014-03-30 11:37:13
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恩，这个也算是CO-IP的。两种相互作用蛋白都要在细胞内共孵育，但是你这样操作也是可以的。你这个实验操作的原理，就是CO-IP的原理。 关于GST pull-down和Co-ip的区别： GST pull-down：不涉及抗体，两个蛋白一个连GST-磁珠作为固定相，另一个作为流动相，存在相互作用的蛋白会被挂在柱子上 Co-IP：这个就是楼主理解的，蛋白A和蛋白B反应，利用A抗体区吊蛋白A，蛋白B也会一起沉淀下来。 其实只要原理理解对了，实验操作上有变通也无妨。 更多：免疫共沉淀实验简介（www.detaibio.com/topics/co-ip-overview.html）  |
6楼2018-04-27 09:42:07
