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[求助] PCR后跑胶没有任何条带已有17人参与

自己设计了10对引物，跑胶没有任何条带，10对引物都没有出条带，可能原因是什么？是不是说明引物设计的不好？
因为，1.同样的cDNA，用别人的引物（同一植物的其他基因引物）就有条带。2.做了温度梯度PCR，每个温度梯度都没有条带，3 用引物直接跑胶，引物有条带，说明引物存在（我担心稀释的时候引物不小心散出来），4 ，请问还能做些什么来找出问题产生的原因
可是设计引物的时候什么二聚体，错配，跨内含子的网上书上找到的哪些能注意的我都注意了，为什么没有条带，请问引物设计还要注意什么？

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1楼 2014-01-16 19:47:58

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引用回帖:

5楼: Originally posted by chiden at 2014-01-16 20:32:35
1. 你可以再试试用Genomic DNA跑PCR，做一个阳性对照，就是你所说的别人的引物。如果有条带，那么原因可能出现在引物设计时设计在了内含子上或者刚好跨内含子了。
也有可能原因不出现在设计上：
2. 重新比对你的引 ...

234问题的都检查过，应该不是这个原因

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9楼2014-01-16 21:08:14

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是不是你参考的基因在里面没有表达。再一个看看你的引物在基因的位置不要在内含子上。

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hehe

2楼2014-01-16 20:22:01

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mjt2007

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1.不一定是引物的问题，换个Taq酶试一试；
2. 如果10对引物退火温度合适，交叉使用试一下。
好运！

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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.

3楼2014-01-16 20:26:51

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引用回帖:

3楼: Originally posted by mjt2007 at 2014-01-16 20:26:51
1.不一定是引物的问题，换个Taq酶试一试；
2. 如果10对引物退火温度合适，交叉使用试一下。
好运！

交叉？就是把不同基因的引物混一起pcr？

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4楼2014-01-16 20:31:24

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