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lilanluo

金虫 (著名写手)

[求助] MTT法测细胞活力 已有3人参与

本人现在用MTT法做测试食用菌液体菌种活力的实验,做下来发现各种各样的问题。请教下各位前辈,跪请帮助
首先有四个疑问,为什么MTT法生成的甲臜是蓝紫色结晶物质,可是检测波长却定在560或570nm(此波长下颜色是黄色和绿色),我做实验过程中产生不少黄色物质,蓝紫色物质不稳定,PS,我用异丙醇溶解MTTf。第二,产生的蓝紫色物质总是贴在塑料的离心管壁上,产生多贴得就多,我用的是可见紫外分光光度计做这个实验(实验室没有酶标仪),要取出溶解MTTF后的液体,这样造成很大的误差,要怎么才不会粘在管壁上。第三,MTT与菌体的反应温度真是让我抓狂,温度越高在560nm处测得的吸光值越高,在50摄氏度之前的温度下基本上没反应,之后温度越高产生的物质的吸光值越高。
跪求能人来解达,同道中人来探讨,感谢一万次。
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小硕毕业散户
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zouqiaoling

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lilanluo: 金币+1, 有帮助 2014-01-10 14:43:16
lilanluo: 金币+10, 有帮助 2014-03-23 17:57:44
MTT 应用PBS溶解吧
用酶标仪吧,不然太不准了
做过好多mtt,没感觉温度的影响,细胞都是在37度和MTT在培养箱里反应
或者没看懂楼主的意图啊,请问您是做的细胞实验么还是菌体的发酵
做一个快乐的人
7楼2014-01-09 20:02:02
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lilanluo

金虫 (著名写手)

我知道颜色问题了,这是因为吸收波长在500-600被测溶液是蓝紫色,而且用不同溶剂波长不一样(这个和文献符合,做实验也可以验证),就是很难理解。
小硕毕业散户
2楼2014-01-08 21:43:54
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lilanluo: 金币+1, 有帮助 2014-01-09 09:53:55
生成的甲臜要溶解的,震荡一下甲臜不就不贴壁了
MTT的反应是酶促反应,37度反应就好了,为什么要50以上?反应要2-4小时
3楼2014-01-09 09:24:57
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lilanluo

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-01-09 09:24:57
生成的甲臜要溶解的,震荡一下甲臜不就不贴壁了
MTT的反应是酶促反应,37度反应就好了,为什么要50以上?反应要2-4小时

谢谢。我也不知道为什么要这么高的温度。但实验结果就是这样。我的实验材料是食用菌液体菌种,可能是细胞壁和细菌不一样,有一篇文献说50摄氏度。贴壁的情况你没遇到吗?真奇怪,我自做这个实验以来,用的塑料离心管不管用什么方法上面的蓝紫色就是洗 不下来,超声啊、加热、振荡。您的管壁上真的没有颜色粘在上面?会不会是因为用的材料不一样,请问你用什么材料的管子。
小硕毕业散户
4楼2014-01-09 09:53:42
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