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15195997166

金虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by 本田透1990 at 2014-01-06 16:20:50
用随机引物,做tailPCR

能说具体点吗 不太懂 这个引物怎么设计
简单而快乐
11楼2014-01-06 18:44:32
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achonghello

金虫 (正式写手)

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8楼: Originally posted by 15195997166 at 2014-01-06 10:08:06
恩 我现在是要对未知序列的基因片段进行扩增,我也找了别的属的这个基因 然后进行比对找出保守序列 但是比对结果不是很好 设计了一个对简并引物 但是结果最终没有扩出来 哎 现在正在郁闷中 想问问 你有什么好的建议...

合成引物之前验证了引物没有?跑了梯度PCR?各种调整一下PCR的条件,退货温度啊时间啊,延伸时间啊什么的
12楼2014-01-06 20:49:29
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15195997166

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by achonghello at 2014-01-06 20:49:29
合成引物之前验证了引物没有?跑了梯度PCR?各种调整一下PCR的条件,退货温度啊时间啊,延伸时间啊什么的...

跑了梯度pcr 也用软件验证了的呢主要就是退火温度吧 延伸时间应该影响不大吧
简单而快乐
13楼2014-01-06 21:19:57
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achonghello

金虫 (正式写手)

内容已删除
14楼2014-01-06 21:58:41
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15195997166

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by achonghello at 2014-01-06 21:58:41
循环外面的那个延伸时间也稍微有点影响吧,我之前做的时候第一次用的是5min,跑不出来,后面弄10min就出来啦。。。不过你也可以换换模板试试看...

我用的就是十分钟 模板之前进行了跑胶验证是有dna的 而且我同时做了好几个模板
简单而快乐
15楼2014-01-07 09:34:26
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gyl121

新虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by 15195997166 at 2014-01-06 10:08:30

楼主,不好意思,我也是没看出要点在哪?呵呵,你可以跟3楼说的一样,那样挺好的;或者是你比对的,找出几个保守的碱基,然后加简并的,看你的大小,最好是18bp以上,要不引物多态性会很高
不经一番寒彻骨,怎得梅花扑鼻香?为科学进步不懈努力
16楼2014-01-07 10:39:21
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