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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 【求助】关于NEB公司的Fse I酶 酶切的疑惑已有2人参与

最近用NEB公司的FseI酶进行酶切,按照说明书上体系如下:
酶 1ul
10Xbuffer  5ul
DNA     1ug
水      X
总体系为50ul
反应条件37度。5-15min或者过夜。

但是我按这个体系  条件一直切不完全载体。把体系缩至20ul后,15h还是切不完全。
现在处在即将崩溃的边缘,,请各位虫友帮忙,有用过这个酶的吗?体系是多少呀?
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-30 18:10:22
鬼羽帝魂: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-04 21:05:28
NEB的内切酶确实切的不快,LZ可以适当减少点基因的浓度,体系尽量小些,多切几管到时候一起回收就好了~~而且需要加BSA,不过NEB的内切酶star活性不高,可以放心多切一段时间
大家相互帮助哈
6楼2013-12-30 16:46:47
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luwei13566

木虫 (正式写手)

我用NEB的pmeI都是用25度切16个小时 切出来的条带很漂亮
大家相互帮助哈
8楼2014-04-08 23:52:37
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