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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于双酶切和通用buffer的问题
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thinkerboy

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于双酶切和通用buffer的问题 已有3人参与

我设计了1对引物并加了酶切位点（EcoR1，  BamH1）但是我查了takara商品目录那本书，两个酶切位点的buffer是不一样的，分别是H和K。但是百度搜素的takara双酶切表可以用1×K buffer,请问我是分步酶切还是用1×K buffer同时酶切，实验室没有师兄师姐，没人可以问，求指教。
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1楼 2013-12-24 15:01:57
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-24 17:05:02
thinkerboy: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-12-24 17:43:21
选择buffer时，选用两种酶相对来说活性都很高的那一种就可以了，一般的EcoR1在各种buffer中都有很高的活性，所以这时你要考虑的是另一种酶的活性相对最高的那种buffer，以后选择时就可以查找酶切buffer表，一般来说就是两种酶活性最高时候的交叉点的buffer就是最适宜buffer。
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4楼2013-12-24 16:49:18
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-24 17:04:43
thinkerboy: 金币+2 2013-12-24 17:43:02
双酶切用1XK的就可以没事   书上给的是最优的一个Buffer
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相信什么才会得到什么
2楼2013-12-24 15:13:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-24 17:04:56
thinkerboy: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-24 17:43:14
很多酶在不同的buffer里的活性都很高，象EcoRI基本上任何buffer中的活性都是100%。说明上给出的双酶切体系是最优的缓冲液成分，直接用就可以了。
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3楼2013-12-24 15:44:46
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)
当初我也遇到过与你类似的问题，看了好多资料显示可以选择单酶切 但是比较浪费。双酶切的话是有一个表格来选择适当的缓冲液的，你选的这两种酶就是加1X KBuffer。ps:我也是菜鸟，希望可以帮到你。
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5楼2015-03-06 10:11:47
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