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刺芹侧耳

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] DNS法测还原糖-----样品颜色与对照颜色差不多,什么原因 已有1人参与

最近在做杏鲍菇栽培料中CMC酶活测定的实验,结果发现用DNS显色后,对照(酶已失活)和处理的颜色深浅差不多,有没有人遇到和我一样的情况?什么原因啊?
   具体过程如下:
   粗酶液制备:取培养料10g,加蒸馏水100ml,4-6度浸提过夜,过滤后得上清液。
   底物:CMC-Na,0.5%
           No.                Ck-6       6-1
     粗酶液(ml)      2         2
     沸水煮10min           是     否
    CMC-Na(ml)      3         3   
       40度保温30min,取出水浴15min,得酶液反应液

          No.                0       1        2       3       4       5           Ck-6      6-1            
   葡萄糖标准溶液(ml)      0     0.2     0.4     0.6    0.8    1.0           0.5       0.5
   水(ml)                  1     0.8     0.6     0.4    0.2     0             0.5       0.5
   DNS(ml)                2      2         2        2       2      2              2         2
                                             混匀水浴加热5min,取出冷却,定容至25ml,测吸光度
     
           以上是我实验的整个过程,结果出来后,理论上应该是6-1的颜色要比Ck-6的颜色深,可是显色后,两个颜色机会一样,肉眼分辨不出来,
     而且CK-6加DNS也显色了。。。。。

     我分析有可能有以下原因:1、样品中的酶浓度的确很低;2、样品中本来就有其他别的和DNS反应后显色的物质,所以显色后对照和处理颜色差不多。
     我想把酶液反应的时间延长一点,比如从30min延长到1h,2h,这样就可以加大显色后颜色的对比,不知道这样可行不?有没有谁也遇到和我一样的情况啊?谢谢!
DNS法测还原糖-----样品颜色与对照颜色差不多,什么原因
右边是对照.jpg
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刺芹侧耳

铁杆木虫 (小有名气)

我后来做实验试了试,把时间延长到了2个小时,酶解温度提高到50,结果比较明显。后来较少到1小时,效果也不错。你可以试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-03-03 07:55:45
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latte33

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我最近测纤维素酶活  也遇到了 吸光值还出现负值  请问你的疑问解决了吗?找到原因了吗?
2楼2014-03-02 17:32:09
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