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嗰叽嗰叽

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌为模板,想P其中一段基因,是提取它的基因组再PCR还是直接菌液PCR? 已有1人参与

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Wearehereandwearewating.
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 21:11:55
菌液PCR重复性很差,菌液PCR其实就是通过高温变性这一步把细胞裂解掉使其DNA暴露释放出来,用释放出来的基因组做模板的PCR反应,但是由于你加的菌体浓度和菌体生长状态不同,你每次菌液PCR实际上模板的浓度都是不一 ...

另外,鉴于Taq酶保真度的问题,如果序列偏大,而你用的酶保真度不高,上T载体测序发生了几个突变,到时候你真是有口难辨~~~
大家相互帮助哈
10楼2013-12-26 21:16:05
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
嗰叽嗰叽: 金币+3, ★★★很有帮助, 那前辈你知道二者结果不同的区别吗?或者菌液无果的原因?多谢了 2013-12-19 20:54:16
提取基因组后再进行PCR比较靠谱,曾经也克隆一个基因,直接菌液PCR无果
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-19 20:41:53
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嗰叽嗰叽

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-19 20:41:53
提取基因组后再进行PCR比较靠谱,曾经也克隆一个基因,直接菌液PCR无果

小弟初学者 ,望加以指点!
Wearehereandwearewating.
3楼2013-12-19 20:55:15
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
嗰叽嗰叽: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢了! 2013-12-20 14:11:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by 嗰叽嗰叽 at 2013-12-19 20:55:15
小弟初学者 ,望加以指点!...

这个具体原因我也不知道哈,感觉纯基因组DNA和菌体差别很大,毕竟纯基因组DNA没有其他菌体成分等杂质,你都可以试一下,如果直接能有菌体PCR出条带就用不着抽提基因组DNA,我抽基因组DNA是因为我用菌体扩增基因的时候,没有条带
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-20 11:46:59
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