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season131124

铁虫 (小有名气)

[求助] 多糖的分步醇沉已有2人参与

本人最近想用40%、60%、80%乙醇分步沉淀多糖,看文献中介绍醇沉前多糖溶液浓度最好是2%—5%,我想问一下,如果我的多糖经过脱蛋白后得到的浓缩液,不想冷冻干燥的话,该怎么确定醇沉前的多糖浓度呢?
   一般分步醇沉的操作是不是先将多糖溶液调整到合适浓度后,加入乙醇,使体系中乙醇终浓度是40%,4℃过夜后,抽滤得到多糖沉淀,然后将上清液继续加入乙醇,使体系中乙醇终浓度达到60%,一般怎么计算要加入的乙醇体积呢?在计算的过程中要不要减掉前面加入的乙醇的体积?
    请问一般做分步醇沉的得率怎么样?会不会出现某一个浓度乙醇沉淀的多糖特别多,另一个特别少呢?
   

   请各位大神赐教,本人将感激不尽~~~~
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唐跳跳_hero

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果不想冷冻干燥可以试试用乙醇、丙酮、乙醚依次进行洗脱,这样既可以去除一些杂质,也可以脱水干燥,所得多糖就呈粉末状,然后再考虑用蒸馏水1:5的比例进行溶解,大致可以得到适宜的多糖浓度,再进行分级醇沉,效果可能比较好
14楼2017-07-19 10:27:56
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