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低调的huali

木虫 (正式写手)

[求助] 求助抗氧化的问题 已有2人参与

最近在做抗氧化的实验,各种纠结啊。做的是体外的抗氧化,分别作了DPPH、螯合铁、羟自由基、还原力还有抗脂质氧化
1.亲们在做这些测OD值时候用的紫外分光光度计好还是酶标仪好呀?我看有的文献,试剂添加量都是ul啊
2.我做DPPH时候,计算清除率公式是:(A对照+A空白-A样品)/对照×100  但是我算出的结果竟然全是负值 为什么呀呀???
3.我做螯合铁实验时候 计算公式是(1-A样品/A空白)×100  我得出的样品比空白大 也是负值
4.做羟自由基时候 根据公式算出的依旧还是负值  到底是为什么啊啊 神啊 在线等大神求教啊 blabla~~~好捉急
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剑客

木虫 (知名作家)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 低调的huali at 2015-10-06 09:04:02
啊哈哈,谢谢回答。这都是我刚上研究生时候的问题咯…不过现在也在做抗氧化的。
...

你好,做过羟基自由基的体系么?应该注意哪些问题,能否推荐几篇靠谱点的文献啊,为什么文献中各种试剂浓度差异那么大?迷乱
19楼2016-11-28 18:03:59
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低调的huali

木虫 (正式写手)

DPPH清楚采取的是:500 μL样品与500 μL 99.5%的乙醇和125 μL含有0.02% DPPH的99.5%的乙醇。混合物在黑暗中反应30 min后,在8000 g、4 ℃下离心5 min。取上清液在517 nm的波长下测定吸光值,采用BHT(0.2 mmol/L)作为阳性对照。自由基清除率的
计算方法为:
DPPH自由基清除率(%)=(A对照+A空白-A样品)/A对照
×100
对照组:500 μL去离子水+500 μL 99.5%的乙醇和125 μL含有0.02% DPPH的99.5%的乙醇。
样品组:500 μL待测样品+500 μL 99.5%的乙醇和125 μL含有0.02% DPPH的99.5%的乙醇。
空白组:500 μL待测样品+500 μL 99.5%的乙醇和125 μL 99.5%的乙醇。
2楼2013-12-18 21:33:16
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低调的huali

木虫 (正式写手)

金属螯合测定 :800 μL样品、10 μL 2 mmol/L的FeSO4, 20 μL 5 mmol/L的菲洛嗪混合在室温下反应10 min后8000 g、4 ℃离心5min。取上清液在562 nm下测定吸光度。用磷酸缓冲液代替样品作为空白对照,2 mmol/L的EDTA作为标准的金属螯合剂作为阳性对照。
金属螯合率(%)=(1-A样品/A空白)×100
3楼2013-12-18 21:33:57
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低调的huali

木虫 (正式写手)

清除羟自由基实验
试管中分别加入1mL 0.05mol/L pH 7.4 的磷酸缓冲液,0.5mL 6mmol/L 的邻二氮菲,充分混匀后,加入
0.5mL 6mmol/L 的FeSO4 溶液,立即混匀。然后向其中加入0.5mL 的样品溶液,混匀,再加入0.5mL 0.1% 的
H2O2,最后补充体积到4mL,同时做损伤管和未损伤管,其中,损伤管中加入0.5mL 0.1% 的H2O2,未损伤管不加H2O2,最后均将体积补充到4mL。于37℃保温1h ,测其在536 nm 波长处的吸光度。
4楼2013-12-18 21:35:27
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