| 查看: 2478 | 回复: 6 | |||
[求助]
磁珠标记、细胞捕获问题 已有1人参与
|
|
最近做纳米磁珠标记抗体捕获细胞，却发现未经抗体标记的磁珠也与细胞非特异吸附，请各位帮忙看看步骤上有什么问题？ 磁珠是通过EDC/HNS方式活化，0.5mg/mg Beads，活化缓冲液10mM MES，pH5.5，室温振荡活化30min，洗脱后进行抗体偶联，25ug/mg Beads，偶联缓冲液10mM PBS，pH 7.4，4度过夜，之后磁分离,PBS洗，PBST+1%BSA封闭，但是没有经过羧基终止反应步骤，是不是可能有残余羧基与细胞表面蛋白产生结合导致假阳性的发生？谢谢。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 磁珠 |
» 猜你喜欢
反应产物总提不上量？聊聊无机焦磷酸酶在核酸合成里的实用价值
已经有0人回复
-
【经验分享】体外转录踩坑无数，挖到一款好用的国产 T7 RNA 聚合酶
已经有0人回复
-
生物物理、生物化学与分子生物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有186人回复
-
体外转录 / PCR 总提不上产量？终于找到稳定好用的无机焦磷酸酶
已经有5人回复
-
[会议预告]2026生物医药产业发展大会
已经有0人回复
-
【产品测评分享】体外转录产量不理想、dsRNA 副产物高？T7 RNA 聚合酶实测体验
已经有5人回复
-
【交流】蛋白标签切除踩坑不断？聊聊 TEV 蛋白酶实操体会
已经有0人回复
-
【交流】SUMO 融合蛋白切标签踩坑？聊聊 SUMO 蛋白酶实操体会
已经有1人回复
-
这些国际期刊正在招募青年编委
已经有22人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 羧基荧光微球标记蛋白抗体
已经有22人回复
- 激光共聚焦观察量子点标记的细胞
已经有29人回复
- 关于多克隆抗体和单克隆抗体的问题
已经有4人回复
- 求助CFSE标记检测细胞增殖
已经有12人回复
- 用CD44抗体磁珠分选结肠癌LoVo细胞中的癌症干细胞？
已经有3人回复
- 世界著名的生物技术公司
已经有32人回复
- 标记有FITC的多肽分子量为3300左右，能透过用多聚甲醛固定后的细胞吗？
已经有6人回复
- 【请教】叶酸标记量子点细胞成像
已经有30人回复
- 【求助/交流】微生物离心所需的离心力
已经有6人回复
2楼2013-12-18 15:07:01
hxl19880503
银虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 317.5
- 红花: 1
- 帖子: 9
- 在线: 9.8小时
- 虫号: 1554146
- 注册: 2011-12-28
- 性别: GG
- 专业: 临床微生物学检验
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gniy: 金币+10, ★★★很有帮助, 我去试试看 2013-12-19 12:28:51
markar: 金币+2, 感谢回帖交流！ 2013-12-19 20:04:39
感谢参与，应助指数 +1
gniy: 金币+10, ★★★很有帮助, 我去试试看 2013-12-19 12:28:51
markar: 金币+2, 感谢回帖交流！ 2013-12-19 20:04:39
|
磁珠是通过EDC/HNS方式活化，0.5mg/mg Beads，活化缓冲液10mM MES，pH5.5，室温振荡活化30min，洗脱后进行抗体偶联，25ug/mg Beads，偶联缓冲液10mM PBS，pH 7.4，4度过夜，之后磁分离,PBS洗，PBST+1%BSA封闭，但是没有经过羧基终止反应步骤，是不是可能有残余羧基与细胞表面蛋白产生结合导致假阳性的发生？ 以下是我们做标记的方法，看一下对你有没有用： 1. 活化方式为EDC/NHSS，活化60min，期间补加一次EDC呢； 2.偶联时PH值会调到8，偶联抗体我们只用2 h呢，不需要过夜的； 3.终浓度1%BSA封闭45 min，这基本上就可以避免非特异吸附呢.（BSA的浓度可以提高，实在不行的话就只能尝试其他的封闭剂呢，如乙醇胺，PEG胺等）； 4.没有听过羧基终止反应步骤呢，封闭就是将残留的羧基完全反应呢。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
蔡小蕾99
3楼2013-12-19 08:55:45
4楼2014-05-27 17:12:17
蔡小蕾99
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 156.7
- 帖子: 132
- 在线: 24.9小时
- 虫号: 3569153
- 注册: 2014-12-01
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
5楼2017-06-15 13:59:56
蔡小蕾99
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 156.7
- 帖子: 132
- 在线: 24.9小时
- 虫号: 3569153
- 注册: 2014-12-01
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
6楼2017-06-15 14:00:38
zld20180203
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 775.1
- 帖子: 268
- 在线: 65.2小时
- 虫号: 7887257
- 注册: 2018-02-03
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
7楼2018-03-24 23:14:51
30