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PCDNA3.1+的抗性测序
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前段时间用老板从国外实验室带的PCDNA做重组质粒，经过一系列酶切，连接，测序，终于做到转染CHO细胞准备过表达，在筛选稳定表达的细胞上出现了问题，一开始用G418筛选，细胞生长状态不好，细胞不是透明的梭形，而是黑色的，后来老板说他可能搞错了，是潮霉素抗性，又做了潮霉素，细胞还是这样，现在老板让我在PCDNA抗性前设置引物，拿去测序，然后去查这个抗性到底是什么，在做稳转之前做了一个瞬转，我现在的问题是不知道如何在PCDNA的抗性前设置引物，有没有哪位大侠指导下，或者说有别的更好的方法？ PS：在做稳转前我做了预实验瞬转，做了细胞免疫荧光，虽然转染效率不高，但是也能看到有的细胞转进去，应该可以排除质粒的问题，转染试剂的问题（虽然说转染试剂已经过期了。。其实老板让我们用的血清也是过期的。但是看细胞生长的还可以。），用潮霉素或者G418筛选的细胞大概1个月这样，发现细胞开始停止死亡，但是没有形成单个细胞群，而且细胞都是黑色的，用胰酶根本消化不下来，贴在皿上，求大侠分析。 |
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shisishese
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