应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCDNA3.1+的抗性测序
31/1返回列表
查看: 2225  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] PCDNA3.1+的抗性测序

前段时间用老板从国外实验室带的PCDNA做重组质粒，经过一系列酶切，连接，测序，终于做到转染CHO细胞准备过表达，在筛选稳定表达的细胞上出现了问题，一开始用G418筛选，细胞生长状态不好，细胞不是透明的梭形，而是黑色的，后来老板说他可能搞错了，是潮霉素抗性，又做了潮霉素，细胞还是这样，现在老板让我在PCDNA抗性前设置引物，拿去测序，然后去查这个抗性到底是什么，在做稳转之前做了一个瞬转，我现在的问题是不知道如何在PCDNA的抗性前设置引物，有没有哪位大侠指导下，或者说有别的更好的方法？
PS：在做稳转前我做了预实验瞬转，做了细胞免疫荧光，虽然转染效率不高，但是也能看到有的细胞转进去，应该可以排除质粒的问题，转染试剂的问题（虽然说转染试剂已经过期了。。其实老板让我们用的血清也是过期的。但是看细胞生长的还可以。），用潮霉素或者G418筛选的细胞大概1个月这样，发现细胞开始停止死亡，但是没有形成单个细胞群，而且细胞都是黑色的，用胰酶根本消化不下来，贴在皿上，求大侠分析。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-15 00:07:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shisishese

银虫 (小有名气)
我也在做PCDNA3.1重组质粒转染CHO细胞，G418加压做稳定筛选，做了好几次都没筛选出来，后来发现转染的lipo2000过期了，以为是这个原因导致实验失败；后来就买了新的lipo2000，可还是筛选不出来，细胞经转染后死掉很多，而且与什么都不经处理的细胞比较，转染的细胞在形态上与它无差异。G418加压后，CHO细胞形态是圆形的，看不出有stable line， 真不晓得问题出在哪里
赞一下 回复此楼
2楼2014-12-04 20:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shisishese at 2014-12-04 20:51:02
我也在做PCDNA3.1重组质粒转染CHO细胞，G418加压做稳定筛选，做了好几次都没筛选出来，后来发现转染的lipo2000过期了，以为是这个原因导致实验失败；后来就买了新的lipo2000，可还是筛选不出来，细胞经转染后死掉很 ...

哎 我也是 现在换了罗氏的转染试剂 还是不行 你有条件的话用流式细胞仪吧 我是质粒上没装GFP 不能用
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-05 17:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sars37 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭