24小时热门版块排行榜    

查看: 2535  |  回复: 26
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

爱吃小苹果

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接不成功,跪求指导! 已有4人参与

最近在做构建,但是连接连了很久都没连上,一端是平末端,一段是粘性末端,没别的位点可以选了,只能用这个。用的Takara的T4连接酶,连接是按摩尔比加的,1:3,1:5,1:10都用过,还加了PEG4000,4°、16°过夜都试过,平板上会有很多菌落,但是菌落PCR一直都没有条带,应该都试载体自连,片段3000bp,载体4900bp。哪位大神做过类似的,麻烦支支招吧,愁死了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱吃小苹果

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhang宇微 at 2013-12-09 22:54:30
T 4不是22度吗,四度,十六度不对吧

生工的T4我用过,说明书是22°,takara的说明书应该是16度
9楼2013-12-10 09:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

weishengsu5

木虫 (正式写手)

这个貌似有点大

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-12-09 22:43:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang宇微

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-09 23:37:00
假阳性太多了,可能是载体自连了,所以菌液PCR 什么都没有,很难挑到真阳性。你用什么酶切的,在做连接体系的时候,按1.6%加内切酶在连接反应体系里,连接反应完成后,在37度中让内切酶反应半小时,把自连的载体切开,这样就减少了自连的假阳性。后面在做就能简单点,我也和你一样,现在假阳性是解决了菌液PCR 阳性也很正常,但提了质粒又不对

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-12-09 22:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang宇微

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

T 4不是22度吗,四度,十六度不对吧

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2013-12-09 22:54:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
请填处理意见