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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 载体双酶切回收目的条带
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

[求助] 载体双酶切回收目的条带 已有3人参与

用两种酶双酶切pCI-neo载体且回收酶切完全的条带，理论上应切下22bp，酶切后跑电泳，电泳图上显示有两条条带，如图1，哪一条是酶切完全、我应该回收的条带啊？请高手指教，急！！！(DM:5000,图2是没有进行双酶切的载体）
载体双酶切回收目的条带
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载体双酶切回收目的条带-1
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
1楼 2013-12-03 11:52:18
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drs1998

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-12-25 22:11:19
您说的我都有做，但结果都差不多，您觉得延长双酶切时间怎么样，延长至20h？...

不建议延长酶切时间，容易出现星活性，出现这种情况肯定是某个环节出现问题，不外是酶和DNA，建议做个检测实验：两个酶单独酶切DNA，然后找个确定没有问题的质粒，也用这两个酶去单切，可能会找到原因，不太建议硬往下做
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12楼2013-12-26 19:21:10
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-03 12:24:09
可以根据你的载体大小来判断。
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-03 12:15:16
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-03 12:15:16
可以根据你的载体大小来判断。

但是酶切前后载体大小差别特别小
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
3楼2013-12-03 14:47:45
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-12-03 14:47:45
但是酶切前后载体大小差别特别小...

点样的时候，marker、未酶切的载体、酶切后的一起点样。
赞一下(1人) 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
4楼2013-12-04 08:18:58
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