应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 诱导蛋白表达 SDS-PAGE没有目的条带
51/1返回列表
查看: 3975  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] 诱导蛋白表达 SDS-PAGE没有目的条带 已有1人参与

我最近在做基因的原核表达，做的是一种内切木聚糖酶，表达载体为pET28a，宿主细胞为BL21。将菌液摇至OD=0.5-0.7时加0.2mM IPTG诱导  20度 180rpm培养12h、16h、20h、24h。菌体超声波破碎，破碎后离心有很多白色沉淀，上清可以测出酶活。将上清液和沉淀进行SDS-PAGE电泳，上清中没有目的条带，沉淀中有目的条带。沉淀中有目的条带应该是包涵体，但是为什么上清中可以测到酶活却没有目的条带啊？急求各路高手指点！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
严以律已，宽以待人
1楼 2013-12-02 21:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稻草人的学习

银虫 (小有名气)
嗯  我的酶也是这种情况，希望多交流交流
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-16 21:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-12-03 09:31:14
这说明你的蛋白大部分形成包涵体了，少部分可溶，在上清。上清里的蛋白是有活性的，所以测出酶活。SDS-PAGE上清没有条带是因为表达蛋白大部分在沉淀，上清里面的目标蛋白少，杂带多。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-03 05:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-12-03 09:31:22
1.楼上说的有道理，上清有目的条带，只是和其它条带混在一起不那么明显，
2.再者你看看大肠杆菌里是否含有类似的酶，要有阴性对照，即未表达菌株无酶活
赞一下 回复此楼
星陈代谢
3楼2013-12-03 08:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kx444555 at 2013-12-03 08:23:02
1.楼上说的有道理，上清有目的条带，只是和其它条带混在一起不那么明显，
2.再者你看看大肠杆菌里是否含有类似的酶，要有阴性对照，即未表达菌株无酶活

阴性对照在目的条带那里也有一条带，所以跑出来的sds-page条带阴性和阳性的条带差别不大。请问有什么解决办法吗？
赞一下 回复此楼
严以律已，宽以待人
4楼2013-12-03 08:57:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭