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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gateway克隆B序列末端家不叫A
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

如题，要做gateway克隆，不知道普通的加A TAQ酶能不能用，还有就是必须的是25bp吗？有的文章中在25bp基础上加了个GGGG是什么意思？

[ Last edited by fanwq258 on 2013-12-2 at 12:06 ]
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1楼2013-12-02 11:50:45
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伤何处

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 21:55:47
再请教一个问题，gateway克隆会产生移码突变吗？用TOPO反应的话，引物设计需要注意什么吗？...

TOPO反应的话，只要在正向引物的5'端加CACC就行了吧，不记得有什么特别需要注意的  我没用过gateway构建过表达载体，正在构建启动子+gus的，这个的话只要注意gus不发生移码就成
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18楼2013-12-05 22:01:17
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伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-06 14:39:59
加上4个G，好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，长片段用的高保真的酶，都能成
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2楼2013-12-02 16:47:32
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-02 16:47:32
加上4个G，好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，长片段用的高保真的酶，都能成

有人告诉我设计引物时在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列吗？
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3楼2013-12-03 11:56:58
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伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:45:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 11:56:58
有人告诉我设计引物时在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列吗？...

这个是TOPO克隆的，需要TOPO酶。加attB是用来做BP反应的，需要BP重组酶   两种都是构建entry载体的方法
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4楼2013-12-03 15:35:57
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