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fanwq258

木虫 (正式写手)


[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

如题,要做gateway克隆,不知道普通的加A TAQ酶能不能用,还有就是必须的是25bp吗?有的文章中在25bp基础上加了个GGGG是什么意思?

[ Last edited by fanwq258 on 2013-12-2 at 12:06 ]
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fanwq258

木虫 (正式写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by 434744419 at 2013-12-04 08:32:17
如果加CACC 就不需要B序列。主要是看你选择什么样的入门载体,不过无论哪种,都是invitrogen的。我以前做过,就是加的CACC.比加B序列方便。...

那你能够具体给我说一下怎么做吗?我的载体是attR位点的
10楼2013-12-05 15:42:02
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伤何处

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-06 14:39:59
加上4个G,好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶,长片段用的高保真的酶,都能成
2楼2013-12-02 16:47:32
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fanwq258

木虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-02 16:47:32
加上4个G,好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶,长片段用的高保真的酶,都能成

有人告诉我设计引物时在
上游引物:CACC+目的基因
下游:目的基因
怎么回事啊,都不需要B序列吗?
3楼2013-12-03 11:56:58
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伤何处

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:45:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 11:56:58
有人告诉我设计引物时在
上游引物:CACC+目的基因
下游:目的基因
怎么回事啊,都不需要B序列吗?...

这个是TOPO克隆的,需要TOPO酶。加attB是用来做BP反应的,需要BP重组酶   两种都是构建entry载体的方法
4楼2013-12-03 15:35:57
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