| 查看: 515 | 回复: 0 | |||
[求助]
一直扩增不了目标产物，求助
|
|
求助各位大侠，本人开始课题已经8个月了，一直得不到目的基因，请各位给点建议，多谢了。 先介绍一下我的课题，我要扩增的是虾夷扇贝的一个基因，目前在NCBI数据库中只能找到海湾扇贝的这个基因，没有其他扇贝数据。 用海湾扇贝，牡蛎，蛤类，贻贝等贝类设计不出引物，如果设计兼并引物的话简并度很高，20bp的引物至少需要6个位置兼并，剔除海湾扇贝后设计了很多引物，都扩增不了。后来把海湾扇贝加进去，只能设计一个兼并引物，用这个兼并引物的正向和反向引物和marathon 试剂盒的AP1一起扩增（cDNA是marathon cDNA），得到的条带很弱，切下条带后用同样的引物做二次PCR，得到很亮的条带，切胶回收后subcloning，挑了很多菌落测序，得到的序列能够找到目标引物和AP1，但把这个序列blastn后却没有相似性。 我很怀疑我得到的序列是不是目的基因，到底是新序列还是非特异性扩增，该如何确认？ 我扩增了这么久，得不到目的产物，也很难找到靠谱的引物，该如何改进策略，从蛋白入手还是建phage cDNA文库，建了文库后如果用海湾扇贝的cDNA抗体来筛选把握大不大？ 该如何预判我的目标基因到底在虾夷扇贝中表达不表达？是不是我的目标产物根本不表达（从文献中看各种物种都普遍表达）？ 请各位高手给点建议，多谢了。 [ Last edited by garonne on 2013-11-26 at 14:50 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
Taq Mix 扩增的pcr产物能不能直接体系回收
已经有4人回复
- 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！
已经有25人回复
- PCR产物不做纯化和胶回收，直接TA克隆可以吗？
已经有13人回复
- PCR扩增不出目的条带
已经有12人回复
- 求助~RACE扩增不出目的条带
已经有11人回复
- PCR不出目的条带的原因
已经有12人回复
- 求助，换了高保真酶扩不出来目的条带
已经有26人回复
- OVER-LAP PCR第二轮扩增不出来条带
已经有6人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- PCR产物电泳时，为什么有的条带不亮，有的特别亮呀？
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收，总是有一条杂带的大小是目的片段的两倍大小
已经有8人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】PCR产物测序总是不对
已经有13人回复
- 【求助/交流】P不出正确条带
已经有18人回复
- 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上
已经有6人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
10