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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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anna87

新虫 (初入文坛)

[求助] 表达载体的选择及连接 已有1人参与

目的基因连到PMD18-T。转化DH5α,挑菌斑摇菌测序正确,再怎么连到表达载体上   需要准备什么  谢谢
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呀薯条

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-12 15:35:39
我也正在做表达,不过是原核基因的表达,还在学习中,不过有看到说是要是有加酶切位点的话,要先检测下,你的目的基因中是否会有该酶切位点,没有最好,不然会影响最后的结果
6楼2013-12-12 09:16:46
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-25 18:09:42
你是真核表达,还是原核表达

你是动物还是植物?

你连pMD18-T时,基因两头带酶切位点了吗?如果带了直接酶切基因及载体,然后连接,如果没有,就重新设计带酶切位点的引物,PCR后再酶切做连接
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-25 15:28:09
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
注意起始密码子和终止密码子,是否有tag等等
3楼2013-11-25 18:26:39
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-12 15:35:30
如果原核表达,注意读码框,一定要对准,后面不用考虑终止密码子,一般的原核表达载体上都有终止密码子,特别是带有标签的载体,一定要注意读码框。真核表达载体插入片段一定要有ATG和终止密码子
4楼2013-11-25 20:41:34
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