【答案】应助回帖

眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！

11楼2013-11-28 08:22:24

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11楼: Originally posted by yghboy168 at 2013-11-28 08:22:24
体外互作，可以用凝胶阻滞技术EMSA，体内互作才要用免疫共沉淀CHIP技术

是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术，我想做的是一种辅助蛋白纯化物和一种酶纯化物在体外的相互作用，这种能不能做啊？把两种混在一起测酶活吗难道？纠结

12楼2013-11-29 09:52:32

yghboy168

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【答案】应助回帖

理论上,可以，但是目的酶蛋白和抗体标签结合后或许会影响酶活，比如抗体结合到了酶的活性中心。你为什么不分开做？

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13楼2013-11-30 08:15:34

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13楼: Originally posted by yghboy168 at 2013-11-30 08:15:34
理论上,可以，但是目的酶蛋白和抗体标签结合后或许会影响酶活，比如抗体结合到了酶的活性中心。你为什么不分开做？

分开做怎么讲？以我目前了解的情况得知这个辅助蛋白已更改是可以促进酶活的，为了验证它是不是促进酶活所以我像做体外相互作用，在生物体内的时候辅助蛋白基因和酶的基因是连在一起的，单独克隆酶基因转化到相应宿主菌的时候酶活低，把酶基因和辅助蛋白基因一起克隆下来的时候酶活性就高啦，想研究他们之间到底是怎样相互作用的，不知道如何下手啊

14楼2013-11-30 11:15:24

zilinweizhu

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【答案】应助回帖

far-western也可以做，不过要使用抗体，先将通过SDS-PAGE凝胶电泳（注意不要煮样品）分离开不同的蛋白，然后转硝酸纤维素膜，在用互作蛋白抚育，最后用抚育蛋白抗体检测。要是你做的是已知蛋白的相互作用，可以将其中一个蛋白点在膜上，然后做抚育，检测。
pull-down也是体外常用的蛋白互作方法，ITC SPR等都是可以做的，不过需要特定的设备才行，一般好一点的学校会配这种设备

15楼2013-11-30 14:24:52

yghboy168

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【答案】应助回帖

这次明白了，原来还以为你做的是蛋白基因互作呢，你这其实属于蛋白-蛋白互作，这用EMSA和chip不合适

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16楼2013-12-01 07:50:02

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16楼: Originally posted by yghboy168 at 2013-12-01 07:50:02
这次明白了，原来还以为你做的是蛋白基因互作呢，你这其实属于蛋白-蛋白互作，这用EMSA和chip不合适

呵呵同样感谢你

17楼2013-12-01 18:29:43

萝卜涨价了

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【答案】应助回帖

恩体外检测的话，方法还是很多的。。比如GST pull-down、Far western bloting、TAP串联纯化技术、蛋白质芯片技术等。楼主可以分别取了解一下，然后找个自己合适的。
另外，，这些方法除了GST我都不了解。以上这些方法都是从www.detaibio.com/fen-zi-hu-zuo-dui-bi.html这个网址抄过来的，里面有介绍，楼主可以自己去看一下

18楼2018-05-02 09:35:52