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yghboy168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

体外互作,可以用凝胶阻滞技术EMSA,体内互作才要用免疫共沉淀CHIP技术
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
11楼2013-11-28 08:22:24
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by yghboy168 at 2013-11-28 08:22:24
体外互作,可以用凝胶阻滞技术EMSA,体内互作才要用免疫共沉淀CHIP技术

是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,我想做的是一种辅助蛋白纯化物和一种酶纯化物在体外的相互作用,这种能不能做啊?把两种混在一起测酶活吗难道?纠结
12楼2013-11-29 09:52:32
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yghboy168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

理论上,可以,但是目的酶蛋白和抗体标签结合后或许会影响酶活,比如抗体结合到了酶的活性中心。你为什么不分开做?
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
13楼2013-11-30 08:15:34
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yghboy168 at 2013-11-30 08:15:34
理论上,可以,但是目的酶蛋白和抗体标签结合后或许会影响酶活,比如抗体结合到了酶的活性中心。你为什么不分开做?

分开做怎么讲?以我目前了解的情况得知这个辅助蛋白已更改是可以促进酶活的,为了验证它是不是促进酶活所以我像做体外相互作用,在生物体内的时候辅助蛋白基因和酶的基因是连在一起的,单独克隆酶基因转化到相应宿主菌的时候酶活低,把酶基因和辅助蛋白基因一起克隆下来的时候酶活性就高啦,想研究他们之间到底是怎样相互作用的,不知道如何下手啊
14楼2013-11-30 11:15:24
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

far-western也可以做,不过要使用抗体,先将通过SDS-PAGE凝胶电泳(注意不要煮样品)分离开不同的蛋白,然后转硝酸纤维素膜,在用互作蛋白抚育,最后用抚育蛋白抗体检测。要是你做的是已知蛋白的相互作用,可以将其中一个蛋白点在膜上,然后做抚育,检测。
pull-down也是体外常用的蛋白互作方法,ITC  SPR等都是可以做的,不过需要特定的设备才行,一般好一点的学校会配这种设备
15楼2013-11-30 14:24:52
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yghboy168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这次明白了,原来还以为你做的是蛋白基因互作呢,你这其实属于蛋白-蛋白互作,这用EMSA和chip不合适
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
16楼2013-12-01 07:50:02
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by yghboy168 at 2013-12-01 07:50:02
这次明白了,原来还以为你做的是蛋白基因互作呢,你这其实属于蛋白-蛋白互作,这用EMSA和chip不合适

呵呵  同样感谢你
17楼2013-12-01 18:29:43
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萝卜涨价了

铜虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

恩  体外检测的话,方法还是很多的。。比如GST pull-down、Far western bloting、TAP串联纯化技术、蛋白质芯片技术等。楼主可以分别取了解一下,然后找个自己合适的。
另外,,这些方法除了GST我都不了解。以上这些方法都是从www.detaibio.com/fen-zi-hu-zuo-dui-bi.html这个网址抄过来的,里面有介绍,楼主可以自己去看一下
18楼2018-05-02 09:35:52
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