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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用基因组DNA进行PCR怎么设计引物啊
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 用基因组DNA进行PCR怎么设计引物啊 已有1人参与

各位大神，我要用基因组DNA进行PCR反应，但现在知道了mRNA的CDS序列，请问该如何设计引物扩增出我的目的条带呢  目的条带包含一个突变位点。本人为新手，还望各位有经验人士，指点迷津，非常感谢！
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1楼 2013-11-20 11:10:24
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电魂

铜虫 (初入文坛)
找出目的突变点在这个基因的哪个外显子上，在外显子两边的内含子区域设计引物扩增后测序，测序引物离你的突变点长度要超过60bp，这样你就能清晰的读出突变点。
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5楼2013-11-21 20:48:47
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-26 09:49:52
根据CDS设计就行了，突变位点如果在目的片段两侧直接设计引物就能突，如果在中间就重叠PCR
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-11-21 11:02:50
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守望者047

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-26 09:49:56
用ncbi的blastn查找一下，看看有没有全序列，用primerpremier5.0在跨内含子和外显子的保守区域设计引物，祝实验成功！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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数往者顺，知来者逆！
3楼2013-11-21 14:48:31
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 守望者047 at 2013-11-21 14:48:31
用ncbi的blastn查找一下，看看有没有全序列，用primerpremier5.0在跨内含子和外显子的保守区域设计引物，祝实验成功！

话说没有DNA全序列，只有mRNA序列，该怎么办？就想通过mRNA序列，找到其外显子和内含子的序列、位置  以便设计引物
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4楼2013-11-21 17:05:17
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