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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于水体中细菌浓缩的问题！
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)

[求助] 关于水体中细菌浓缩的问题！

各位虫虫好！
是这样的，楼主想把一定海水中小于1.2μm的细菌浓缩50倍。看文献中的方法是：海水经1.2μm的膜过滤后，使滤液在8000rpm下离心30min，离心后会形成“pellets”（好吧，我理解为细菌浓缩后会形成的“小球”？~>_<~），然后用0.22μm膜过滤后的海水去再悬浮“pellets”，定容要一定体积。于是楼主今天下午就照这个方法试了下，可离心后毛都没有啊~传说中的“pellets”是神马？（我离了2L多的天然海水，不存在细菌数量不够的问题）
我自己另想了一个方法，就是把一定体积海水经0.2μm膜过滤，这样细菌都到膜上去了，再用0.2μm过滤的不含细菌的一定体积海水去洗这张膜，这样也起到了浓缩细菌的目的。但这个方法的问题是，楼主要用浓缩后的细菌去降解有机物，经过这么一过滤到膜上，细菌的活性会不会受到影响？毕竟这种抽滤对生物活体是会有影响的。
唠叨了这么多，虫友们有没有更好的浓缩细菌的方法呢？迫切想知道~谢谢大家！
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1楼 2013-11-12 18:53:05
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 漂流瓶_@ at 2013-11-12 21:06:26
离心浓缩后的“小球”肉眼不一定看得到。透明的海水里直接怎么能看到菌呢

我也觉得是看不到的，那文献中的“pellets”是指什么呢？而且没有这个“pellets”的话我也没法吸上清再悬浮了，困惑
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7楼2013-11-12 21:10:48
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励应助 2013-11-12 20:49:16
将０．１～１％的壳聚糖溶液加入５～１５倍量体积的细菌或病毒培养液中，室温下１００～３００ｒｐｍ搅拌５～３０分钟，再加入１～３０％的三聚磷酸钠或硫酸钠或柠檬酸钠或硫酸氨，继续搅拌１５～５０分钟，自然静置２～１０小时待其自然沉淀至１／６以下，收取沉淀即得浓缩的细菌或病毒。本发明所用试剂仅为壳聚糖和三聚磷酸钠或硫酸钠或柠檬酸钠或硫酸氨两种。将悬浮的细菌或病毒沉淀后，仅需吸出上清达到浓缩的效果，并不需分离微球亦不关注其成球性状。其安全性好，成本低廉。整个工艺流程简便，成本低廉，效率高，易于大规模生产。
参考内容：http://www.aptchina.com/faming/1710654/
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2楼2013-11-12 19:31:34
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接离心不行？我记得以前提水样总DNA的时候就是直接离心的
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但行好事，莫问前程
3楼2013-11-12 20:39:09
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小木棉要努力

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2013-11-12 19:31:34
将０．１～１％的壳聚糖溶液加入５～１５倍量体积的细菌或病毒培养液中，室温下１００～３００ｒｐｍ搅拌５～３０分钟，再加入１～３０％的三聚磷酸钠或硫酸钠或柠檬酸钠或硫酸氨，继续搅拌１５～５０分钟，自然静置 ...

看起来有点麻烦的样子。他这样做会破坏细菌的活性吗？还需要定量检测浓缩倍数，有点费时
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4楼2013-11-12 20:58:57
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