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天然药物化学研究生该如何进入工作状态
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对于初入研究生实验阶段的人来说，做实验对自己来说是个全新的开始和考验，当然你也可以学习师哥师姐们的工作经验，不过您完全可以自己开展工作，这里我就自己的工作经历谈点感想。 1，在完成一年理论课的同时建议长去实验室看看他人是怎么工作的，明白工作的实际目的并了解仪器的使用和步骤。 2，在次同时要弄清楚自己的课题是什么，并做好充分的前期准备，比如查阅资料文献以及背景等信息。 3，打理自己的实验室，查看自己的仪器清单，看对于工作是不是可以开展顺利，可以和师哥师姐们详细查询或自己看清楚。 4，那么以上准备好了以后，就可以找人买药材了。药材鉴定要认真仔细，找系里的老头们就可以了。 5，药材提取就是自己的事情了，可以先提取一点看看初步结果，研究生阶段的研究基本任务是分新的化合物并鉴定结构。做系统分离是件很辛苦的工作，建议提取最好是用温和的方法来做，比如渗漉。溶剂可以用甲醇或95%乙醇或温热条件。这样的目的是避免东西更少的变化。对以后的工作很有意义。 6，提取工作结束以后就是怎么分离了，建议多参考以下相关专著。徐任生先生的著作可以好好看看。对刚入门的人说很有帮助。 7，上次说到提取工作已经结束了，接下来就看具体的工作了，首先是你的提取物是否需要液液分配一下，不过这里要讲一下，有的人喜欢提取物直接拌样上柱层析，这会给以后的工作带来麻烦，考虑到植物化学成分复杂性，所以最好要液液分配一下，用不同极性的溶剂从低到高依次萃取一下。 8，通常萃取用石油醚；乙酸乙酯；氯仿；正丁醇，萃取前先将提取物用温热水混悬一下，尽量混悬，用等量的溶剂萃取数次或色很淡。一般可以是6次或更多次。萃取部分不要弄混，当然他们的萃取物内的化合物可能有些交叉，可以忽略不计，然后就是回收了，温度不要太高就可以了。 9，萃取工作做完就是有针对性的粗分离及精细分离了。 10，还有一点很重要，在萃取之前建议留样冰箱保存，另外石油醚部分；乙酸乙酯部分；氯仿部分；正丁醇部分也强烈建议留样。 11,上次我说到关于石油醚部分；乙酸乙酯部分；氯仿部分；正丁醇部分的留样,今天我们讲讲怎么开展具体工作.呵呵!对于高手可以不毕看贴! 12,石油醚部分,乙酸乙酯部分,氯仿部分,正丁醇部分.我们分别讲讲吧. 13,石油醚部分:石油醚部分的分离可以点样先做预实验,这里你可以看看徐老先生的书大概了解一下.首先点样检测看有几个主要的点.展开剂可以用石油醚和乙酸乙酯不同比例组合,或用己烷:乙酸乙酯组合.一般就用硅胶板就可以了.根据条件就可以直接硅胶柱层析了.这里分离的主次完全可以自己来定的.可以先分离其他部分.一般这类东西分离难度不是很大.但也有不太容易分的.可能会有结构相象的东西.这类东西也许不是很稳定,要注意分离时间和回收温度和光照等因素,在分离主要点后应和留样的做层析比较.看看是不是有问题.分离程序建议采用硅胶柱层析200-300目的薄层不要用.不然分离时间会很长.东西可能会在柱子上变化. 上次谈到石油醚部分的简单分离思路!这次谈谈乙酸乙酯部分的初步分离: 乙酸乙酯部分的分离也很容易,属于脂溶性的部位和石油醚部分较相似.只是极性稍大点,根据文献所提供的资料信息判断大致是什么成分类,一般有黄酮等.分离这类东西可以用硅胶柱即可分离,你还可以用sephadex-lh20分离他们,一般用甲醇做为洗脱溶剂.不过这里要强调一点先做TLC检视成分的多少主点和次点.也可以叫目标点和量较少点.建议划好模拟TLC图例. 有一点在这里补充一下.药材提取的时候药材量不能太少.至少为20KG以上.有些朋友在最后分离微量成分的时候到最后很难在纯化.因为母液量到最后可能只有几个毫克.HPLC制备也不现实! 上次讨论了乙酸乙酯,氯仿部分下次讨论.我来讲讲丁醇部分 丁醇部分对各位战友来说可能难度相对大点.对我本人来说也一样的.水溶性部分历来都是分离工作的重点.同样也是结合各种分离手段最多的实验工作,水溶性部分包括:正丁醇部分和正丁萃取后的水层了.可以先讲讲丁醇部分. 丁醇部分主要的成分包括:皂苷类等.皂苷分离也是分离中的重点. 有一点说明(建议做跟踪和摸条件的硅胶板用高效硅胶版)这样检识起来和定位起来都方便,另外不要用薄层层析硅胶做大量粗分,否则影响进度,那样会时间沉长,苦不堪言.(吃过亏!!!) 以前讨论的分离问题很多也很乱，不过都不是具体针对某一植物的，是大致的方法，分离手段也不相同的，采取什么样策略也不一样，我们再聊聊正丁醇部分及水部分分离的所谓难点，上次也讲了丁醇的分离首先要注意的前提：比如TLC定位和条件载体的重要性，当对你所要分离的部分大致情况有了初步的掌握以后，下一下就是着手分离了，根据我以前的经验，正丁醇部分也可以先上大孔吸附树脂分段一下，这样对分离也是很有帮助的，最好不要跳过这个步骤，这样可以达到粗分的目的，又可以除掉和水部交叉的东西，值得借鉴。把丁醇部分分成若干部位后在有选择性的分离。大孔吸附树脂分段：可以按常规的方法分段就可以了，一般用AB-8、D101、HP20皆可。洗脱方法就用水、10%醇、30%醇、50%醇、70%醇、95%醇，梯度不要太接近。这样处理完以后丁醇部位的化合物就可以按不同的“极性群”被初步分开了，对于分离是有意义的。 上次讲到所谓不同“极性群"被初步分离开了.下一不就是具体针对性的分离了, 水、10%醇、30%醇、50%醇、70%醇、95%醇这些部位的分离是很花时间和精力的,一定要认真做好笔记和未上样部位的TLC图样笔录,有条件可以保留到冰箱里,或做一下HPLC图谱保留.以便以后对照用.这是发现化合物分离过程当中变化的一个办法.虽然很麻烦但很有用.分离这部分的方法其实有很多,但是我们最后用的最多的就是反相层析.作为有代表性皂苷物质反相层析应用最有效,至于条件可以根据情况自己摸,一般我们用水:甲醇系统,水:丙酮系统,水:乙腈系统,水:某某等.有些甾类成分在分的过程中不是很稳定,所以要注意溶剂和其他外界因素对他们的影响,觉得不对劲可做TLC或HPLC比对. |
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