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gengpy470

新虫 (小有名气)

[求助] 镍柱亲和层析纯化

求助各位高手,我做的是真核细胞内纯化his标签蛋白,做镍柱亲和层析时在流穿的部分也检测到目的蛋白了,我的裂解液里含10mM咪唑,请大家帮我分析一下原因
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haodanfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-18 17:25:45
1、可以在样品中添加适量的尿素
2、建议样品浓缩之后再上样
6楼2013-11-18 16:42:10
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查看全部 7 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-18 17:25:26
10mM咪唑就将目的蛋白洗脱了?
有可能真核蛋白各种修饰和折叠较多,将his标签包埋在内部了。
Thank-you,so-blue.
2楼2013-11-08 15:16:56
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gengpy470

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2013-11-08 15:16:56
10mM咪唑就将目的蛋白洗脱了?
有可能真核蛋白各种修饰和折叠较多,将his标签包埋在内部了。

那我要是加变性剂脲的话,在裂解液,漂洗液,和洗脱液里都需要加吗,我认为在洗脱液里不需要加了吧
3楼2013-11-08 16:39:15
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

不用吧,只需要在变性的时候加变形剂吧。
Thank-you,so-blue.
4楼2013-11-08 17:13:23
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