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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] 最近做转化快疯掉了

因为定量DNA的nano好像不好用了,所以只能通过肉眼看DNA浓度。
    酶切胶回收后跑电泳,感觉浓度还可以,可是连接转化后,就是不长菌落!
   PCR产物连T载体成功,说明连接酶没问题。用对照质粒转化成功,说明转化没问题。难道是酶切这步有什么问题吗?
   做了好多次都失败了,要崩溃了,求大神帮助啊,给些指点。
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黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转化没有长菌落,这基本可以说明酶切是没有问题的,说明质粒被切开了,我觉得你在看亮度的时候没有考虑片段长度。一般来说,相同浓度的DNA,片段越长越亮,假如说有两段长度相同的DNA:a和b,a的亮度是b的5倍,那么可以认为a的浓度也是b的5倍;如果他们的浓度一样的话,同样可以认为a的长度是b的5倍。反推回去也是一样的。总之,亮度是由长度和浓度共同决定的。
我给不了你宝马香车,锦衣玉食,但我会用一辈子去疼你,爱你,保护你
19楼2013-11-13 10:37:28
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

肉眼看DNA浓度

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2013-11-07 22:52:42
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windleakey

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-11-07 22:52:42
肉眼看DNA浓度

琼脂糖电泳嘛,看亮度了,能给些建议不
3楼2013-11-07 22:58:10
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-11-08 08:23:19
不知道你想表达啥意思?
说明白些好嘛?
是不是想将目的DNA连接至某vector呢?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2013-11-07 23:45:01
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