应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR实验中关于标曲和溶解曲线的问题
51/1返回列表
查看: 4428  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lwm713

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR实验中关于标曲和溶解曲线的问题

最近做定量，结果总是不太好，总之有三个大问题：1、标曲不太好（R2太低）；2、扩增效率太高或太低；3、溶解曲线出现多个峰，而且前面的部分呈震荡趋势。
其中水也换过，引物也换过，就是结果不好，蛋都要碎了。。。。
标曲不很好原以为是混的不均匀（原来只用手轻弹十几下用枪混匀十几下），后来标曲稀释的时候用漩涡振荡器混匀，但结果还是不是很好（R2<0.98），而且扩增效率明显增大了很多。。。。
求大神指点迷津！！！
定量PCR实验中关于标曲和溶解曲线的问题
标曲.jpg


定量PCR实验中关于标曲和溶解曲线的问题-1
溶解曲线.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

QPCR 问题简答

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-01 10:25:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lwm713 at 2013-11-01 14:37:19
引物是十一的时候刚从生工公司买的，应该没有问题。另外，我的样品是直接提取的DNA，不是扩增产物。难道是设计的质粒的问题？？？...

把PCR产物跑电泳看看是不是一条带。
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-01 23:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

zzl2516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-01 14:37:00
lwm713: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-02 17:54:41
你的扩增曲线怎么样 都能达到平台期么 建议调一下模板和引物的浓度 把标曲的CT值调的提前一点 个人感觉到30了基本都不靠谱，对于扩增效率高的问题 如果现在用的是三步法可以改为二步法，扩增效率会降下来，另外就是反应条件的问题了，你的溶解曲线这么乱，把扩增产物跑电泳分析一下吧
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-01 11:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-01 14:37:03
lwm713: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-02 17:54:53
熔解曲线很不平滑，我觉得你的扩增有问题。熔解曲线很少有这么多峰的，通常即使是有引物二聚体，通常也是主峰前面一个小峰。你的引物特异性怎么样，是否是单一产物？如果熔解曲线峰不单一，通常说明有非特异扩增或者引物二聚体，相应的扩增效率会增大。
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-01 12:28:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwm713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zzl2516 at 2013-11-01 11:20:38
你的扩增曲线怎么样 都能达到平台期么 建议调一下模板和引物的浓度 把标曲的CT值调的提前一点 个人感觉到30了基本都不靠谱，对于扩增效率高的问题 如果现在用的是三步法可以改为二步法，扩增效率会降下来，另外就是 ...

模板和引物的浓度怎么调才能把标曲的CT值提前一点？
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-01 14:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭