应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌液pcr总是做不出！求高手解答！
51/1返回列表
查看: 4152  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

winnerfc

新虫 (小有名气)

[交流] 菌液pcr总是做不出！求高手解答！

我用takara的rTAQ酶做菌液PCR，总是没有目的条带，只有引物带，抽质粒酶切鉴定后证明是有阳性菌的，可是菌液pcr上没有条带。
           
            我用的体系如下： rtaq酶   5ul，引物1  0.2ul，引物2  0.2ul，菌液  1ul ，去离子水   3.6ul。 pcr程序就是用的rtaq酶说明书上的程序。（我换了一个高保真的酶也做过，是可以扩出目的条带的）

到底问题出在哪里呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-11-01 09:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌液PCR的预扩增，温度设高点95-97，先来5-8min，保证破胞吧。
赞一下 回复此楼
18楼2013-11-08 15:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-11-02 10:22:13
winnerfc: 金币+5 2013-11-02 11:29:37
你可以用质粒作为模板来扩，质粒需要稀释，根据跑胶浓度来确定怎么稀释。一般是稀释50~100倍。有时候因为仪器或者程序设置原因导致菌液里的菌体细胞壁不能完全破坏，不能释放出DNA，没有模板的话肯定扩不出来的。可以试试，等你好消息！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-01 11:44:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 大家来找茬 2013-11-02 10:22:48
哦 对了   你的这个体系有问题啊   应该还有dNTP  和 酶配套的buffer吧？
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-01 11:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cccooo000

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-11-02 10:22:24
本帖内容被屏蔽
4楼2013-11-01 16:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
winnerfc11楼
2013-11-02 11:31   回复  
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinwei331 at 2013-11-02 06:54:47 …………………………

查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭