应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Ecoli BL21 DE3表达蛋白时突然变澄清，但非噬菌体污染，究竟是怎么回事？
52/1返回列表
查看: 4033  |  回复: 17
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

quxd

金虫 (正式写手)

[交流] Ecoli BL21 DE3表达蛋白时突然变澄清，但非噬菌体污染，究竟是怎么回事？已有11人参与

最近利用Ecoli BL21 DE3/pET28a生产蛋白，小摇瓶培养很正常,IPTG诱导后蛋白活性也很好；但在7L发酵罐中，起初培养还算正常，加入IPTG之后不久菌就越摇越稀，感觉像裂解了。检查噬菌斑也没有发现噬菌体污染，也尝试了各种培养基，也不行。不知各位有没有碰到过类似情况，该如何解决？

[ Last edited by quxd on 2013-10-31 at 12:16 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2013-10-31 12:15:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quxd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 欧阳-90 at 2013-11-02 15:17:28
我曾经也遇到过类似的情况，但是不是发酵罐的培养，而是0.6L摇瓶培养出现和你一样的情况，加了IPTG之后菌越来越澄清。已知找不到原因。只好每次接种前都是重新转化，不用甘油菌接种

后来有效果吗？？
赞一下 回复此楼
11楼2013-11-02 16:18:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

lpzl

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 13:27:44
IPTG对细胞有毒性，会抑制菌生长，浓度时多少？还有啥时候加的？？一般在菌对数期加比较好。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-10-31 12:22:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangtailong

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 22:24:07
诱导时od不能太低，一般在对数期中后期，注意补料跟进，菌体自溶可能是缺乏氮源，摇瓶多转接几次看是否有自溶，菌种复壮后再试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-10-31 13:35:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quxd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-10-31 12:22:41
IPTG对细胞有毒性，会抑制菌生长，浓度时多少？还有啥时候加的？？一般在菌对数期加比较好。。。

IPTG用的是0.1mM，OD在15-20的时候加的。是不是太老了？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-10-31 22:58:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭