| 查看: 5329 | 回复: 12 | |||
君扬1989铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
已经得到目的基因的全长，现在要PCR将目的基因全长P出来，如何设计引物？谢谢
|
 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有161人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
如何寻找目的基因
已经有6人回复- PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗？急！！！
已经有9人回复
- 引物设计 基因全长的获得
已经有13人回复
- 基因插入突变的一点疑惑？
已经有7人回复
- Realtime PCR 内参与目的基因问题
已经有11人回复
- 以前能p出的基因现在p不出来了
已经有7人回复
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- 构质粒P基因全长的时候用逆转录的模板P不出来，可以提DNA来P吗？？
已经有5人回复
- 拿到基因全长，做什么？
已经有10人回复
- 如何P一个全长基因？
已经有13人回复
- 要P一段基因全长，已知CDS，怎么设计引物啊？
已经有10人回复
- 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
已经有8人回复
- 根据已知序列，从相同菌种(菌株编号不同)中能PCR出目的基因吗？
已经有6人回复
- 如何设计引物，扩增目的基因的ORF？
已经有6人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】知道目的基因定位标记，想知道目的基因序列信息，怎么办
已经有7人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
myprayer
专家顾问 (著名写手)
- MolEPI: 12
- 应助: 81 (初中生)
- 贵宾: 2.822
- 金币: 32407.7
- 散金: 1696
- 红花: 158
- 沙发: 3
- 帖子: 2275
- 在线: 822.5小时
- 虫号: 1759711
- 注册: 2012-04-16
- 专业: 生物力学与生物流变学
- 管辖: 生物医药区
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！my版热心 2013-10-31 13:05:13
君扬1989: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-01 18:45:05
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！my版热心 2013-10-31 13:05:13
君扬1989: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-01 18:45:05
|
标准的PCR操作程序是将各种所需反应成分分别加入PCR反应管中，然后根据具体的实验要求，设置一定的循环参数，进行循环扩增。具体如下： (1) 向PCR反应管中依次加入 DNA模板 50～300ng (约为102～105拷贝DNA) 引物(3'→5'，5'→3')各 2μl 10μmol/L (终浓度为0.4μmol/L) dNTP 2μl 5mmol/L (终浓度为0.2μmol/L) 10×PCR缓冲液 5μl 1/10体积 (终浓度为1×) MgCl2 3μl 25mmol/L (终浓度为1.5mmol/L) 注意的地方： 1. 引物的质量是保证PCR特异性的关键，引物过长或过短均会使特异性降低，以18～30bp为宜；引物中C+G含量宜在50%左右；引物内部和引物之间不应含有互补序列；引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小于70%；引物的3’末端与模板DNA一定要配对，但末端没有严格的限制，故引物设计时可在5’末端加上限制性内切酶位点和/或启动密码ATG等；引物合成后必须纯化以去除合成产物中的不完整序列、脱嘌呤产物、碱基修饰链等“杂质”；引物的终浓度一般为0.2～0.5μmol/L，过低会影响反应产量，过高会增加引物二聚或错配的几率。 |
2楼2013-10-31 12:22:58
3楼2013-10-31 13:17:40
君扬1989
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 13747
- 散金: 15
- 帖子: 1328
- 在线: 117.9小时
- 虫号: 2473295
- 注册: 2013-05-20
- 专业: 食品科学
4楼2013-11-01 18:47:22
君扬1989
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 13747
- 散金: 15
- 帖子: 1328
- 在线: 117.9小时
- 虫号: 2473295
- 注册: 2013-05-20
- 专业: 食品科学
5楼2013-11-01 18:47:51
6楼2013-11-02 00:38:49
7楼2013-11-02 00:48:56
君扬1989
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 13747
- 散金: 15
- 帖子: 1328
- 在线: 117.9小时
- 虫号: 2473295
- 注册: 2013-05-20
- 专业: 食品科学
8楼2013-11-02 08:34:38
9楼2013-11-02 09:11:35
君扬1989
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 13747
- 散金: 15
- 帖子: 1328
- 在线: 117.9小时
- 虫号: 2473295
- 注册: 2013-05-20
- 专业: 食品科学
10楼2013-11-04 10:13:09