| 查看: 2075 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
凝胶层析蛋白洗不下来
|
|||
|
各位大神： 我而今算是遇到了最诡异的事了。我用的是Sephadex G-75，手工分多次装柱（没有装柱器），肉眼看来柱子装的比较均匀。之前用蓝色葡聚糖跑了一下，能跑出来。但不论是我的蛋白样品或者是BSA溶液，核酸蛋白检测仪均检测不到蛋白质存在。 详细情况是这样的： 1）第一次装柱，蓝色葡聚糖ok，将我的蛋白液【注】与蓝色葡聚糖混合后再次上样，结果在几乎和蓝色葡聚糖出来的同时，检测仪发现有大量蛋白正在洗出来了。但一个蛋白峰过后，再也没有检测到有任何蛋白洗出。 2）用缓冲液冲洗柱床过夜，次日，加入~1%床体积的BSA溶液，发现一个蛋白吸收峰都没有了。 【注】：溶解目的蛋白液的缓冲液是柱缓冲液的5×形式，上样前已经10000g离心去除了上样中的沉淀。柱是25× Φ2.5cm的，流速约1ml/min(恒压)。 这个会的人应该是很简单的，但小弟这边还是自己摸索，希望大家给予点指导。不胜感激 |
回复此楼» 猜你喜欢
看来今天不会放榜了？
已经有8人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有13人回复
-
人气不行了
已经有7人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有18人回复
-
感觉是下周放榜了
已经有12人回复
-
我面上完蛋了
已经有8人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有25人回复
-
什么时候开奖？
已经有7人回复
-
时间戳又变了
已经有18人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有27人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 疏水参数的定义
已经有5人回复
- 请教一下做疏水层析遇到的问题
已经有5人回复
- 有关疏水层析的问题
已经有18人回复
- 梯度洗脱-离子交换与疏水层析
已经有10人回复
- 疏水层析填料的选择
已经有4人回复
- 洗脱不下来，怎么办？
已经有6人回复
- 凝胶层析和装柱以及柱效问题
已经有21人回复
- 怎样把strep标签加到重组蛋白的C端
已经有3人回复
- 疏水层析蛋白洗不下来怎么办
已经有10人回复
- 凝胶层析图谱问题
已经有23人回复
- 蛋白质纯化凝胶层析
已经有9人回复
- 己二胺室温下为固体，怎么用？
已经有13人回复
- 疏水柱为何挂不上蛋白，求解！
已经有9人回复
- 在ms用distance怎么改变层间距
已经有6人回复
- FITC标记蛋白中的Sephadex G25柱
已经有7人回复
- 【求助/交流】离子交换层析
已经有4人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白的Amylose亲和层析
已经有11人回复
- 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
已经有5人回复
- 【交流】如果您同时被北师大凝聚态和北科大材料科学工程录取，选哪个？
已经有15人回复
|
我参考的是来自上海西宝生物的说明书（http://www.docin.com/p-25091200.html）。其他有提到“凝胶过滤的上样量一般为5％的床体积，我们建议初次上样量控制在1－2％的床体积”。 此外，在发完此贴后，我用两根相同的柱子连接在一起做成一个简易的装柱器，一次性完成装柱。用1ml的BSA测试，得到与帖子中提到的第一次的结论相同，即蛋白和蓝色葡聚糖同时被洗出来。 |
8楼2013-11-02 00:14:51
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19804.7
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2793.8小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
2楼2013-10-31 19:27:10
3楼2013-10-31 19:38:02
4楼2013-11-01 09:25:19
