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[求助]
凝胶层析蛋白洗不下来
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各位大神： 我而今算是遇到了最诡异的事了。我用的是Sephadex G-75，手工分多次装柱（没有装柱器），肉眼看来柱子装的比较均匀。之前用蓝色葡聚糖跑了一下，能跑出来。但不论是我的蛋白样品或者是BSA溶液，核酸蛋白检测仪均检测不到蛋白质存在。 详细情况是这样的： 1）第一次装柱，蓝色葡聚糖ok，将我的蛋白液【注】与蓝色葡聚糖混合后再次上样，结果在几乎和蓝色葡聚糖出来的同时，检测仪发现有大量蛋白正在洗出来了。但一个蛋白峰过后，再也没有检测到有任何蛋白洗出。 2）用缓冲液冲洗柱床过夜，次日，加入~1%床体积的BSA溶液，发现一个蛋白吸收峰都没有了。 【注】：溶解目的蛋白液的缓冲液是柱缓冲液的5×形式，上样前已经10000g离心去除了上样中的沉淀。柱是25× Φ2.5cm的，流速约1ml/min(恒压)。 这个会的人应该是很简单的，但小弟这边还是自己摸索，希望大家给予点指导。不胜感激 |
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看到冼亮淀粉酶君在小木虫里的关于凝胶层析的回复，膜拜中(http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3059537)。话说1ml样品对于我的柱子来说是差不多1%了。因为我的空柱体积约为196ml，我泡凝胶的时候，准备的胶体积约为120ml。而1ml/120ml<1%。请冼亮淀粉酶君多多指教啊  |
11楼2013-11-02 20:43:46
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
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2楼2013-10-31 19:27:10
3楼2013-10-31 19:38:02
4楼2013-11-01 09:25:19