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serhhrr

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 大片段PCR扩增求助已有4人参与

我需要做一个RTPCR,扩增未知目的条带，大小约为3000bp，循环体系如下：94℃ 30s，54-60℃ 30s ， 72℃ 3-4min。酶的话用过LA Taq，Taq酶都用过，也换人操作过，可一直P不出来，求助各位高手！！

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1楼 2013-10-23 15:50:04

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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-11 00:05:19

估计不是酶和反应时间的问题，如果不要求高保真的话普通Taq酶应该可以扩增出3 kb片段。如果扩增片段GC含量高可以用GC buffer。既然扩增未知片段，不知道你的引物是什么样的？

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