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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Western Blot 目标条带跑不出来，内参条带清晰
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qinchen1018

银虫 (初入文坛)

[求助] Western Blot 目标条带跑不出来，内参条带清晰 已有5人参与

各位朋友帮帮忙吧，我是新手，刚学做 western blot，内参条带到是挺清晰，也基本一致，但是我的目标蛋白一个条带都没有，这是为啥啊
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1楼 2013-10-23 14:47:56
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liujiao7952

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一抗特异性不够吧，试着提高1抗浓度试试
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8楼2013-12-09 10:47:10
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qinchen1018: 金币+2, ★有帮助 2013-10-23 15:30:07
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-25 13:20:51
这个说的有些笼统，显影时目标条带什么情况，具体点才好分析。内参能检测到，说明基本步骤还是没问题的。
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2楼2013-10-23 15:25:24
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花开未央

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qinchen1018: 金币+3 2013-10-23 15:30:21
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-25 13:21:03
那就可能是抗体的问题了，重新优化一下抗体浓度，另外看一下你的目标蛋白是多大的，要是小分子蛋白也许是转过了也不一定的，亦或是大分子的没转印完全，内参很好说明整个操作是没问题了，那只能是从抗体找原因了，祝实验顺利！
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希望~~~
3楼2013-10-23 15:26:52
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qinchen1018

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2013-10-23 15:25:24
这个说的有些笼统，显影时目标条带什么情况，具体点才好分析。内参能检测到，说明基本步骤还是没问题的。

上样量40微克，内参是GAPDH，目标蛋白是16.5KD、165KD，300mA湿法转膜1h、2h，一抗1:1000稀释，使用odessey成像系统扫膜的
Western Blot 目标条带跑不出来，内参条带清晰
GAPDH.png
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4楼2013-10-23 15:29:44
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