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qinchen1018

银虫 (初入文坛)

[求助] Western Blot 目标条带跑不出来,内参条带清晰 已有5人参与

各位朋友帮帮忙吧,我是新手,刚学做 western blot,内参条带到是挺清晰,也基本一致,但是我的目标蛋白一个条带都没有,这是为啥啊
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qinchen1018

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2013-10-23 15:25:24
这个说的有些笼统,显影时目标条带什么情况,具体点才好分析。内参能检测到,说明基本步骤还是没问题的。

上样量40微克,内参是GAPDH,目标蛋白是16.5KD、165KD,300mA湿法转膜1h、2h,一抗1:1000稀释,使用odessey成像系统扫膜的
Western Blot 目标条带跑不出来,内参条带清晰
GAPDH.png

4楼2013-10-23 15:29:44
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qinchen1018: 金币+2, 有帮助 2013-10-23 15:30:07
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-10-25 13:20:51
这个说的有些笼统,显影时目标条带什么情况,具体点才好分析。内参能检测到,说明基本步骤还是没问题的。
2楼2013-10-23 15:25:24
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花开未央

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qinchen1018: 金币+3 2013-10-23 15:30:21
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-25 13:21:03
那就可能是抗体的问题了,重新优化一下抗体浓度,另外看一下你的目标蛋白是多大的,要是小分子蛋白也许是转过了也不一定的,亦或是大分子的没转印完全,内参很好说明整个操作是没问题了,那只能是从抗体找原因了,祝实验顺利!
希望~~~
3楼2013-10-23 15:26:52
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daibingling

铁虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-25 13:21:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by qinchen1018 at 2013-10-23 15:29:44
上样量40微克,内参是GAPDH,目标蛋白是16.5KD、165KD,300mA湿法转膜1h、2h,一抗1:1000稀释,使用odessey成像系统扫膜的

GAPDH.png
...

上样量和转膜时间都没问题,那就把一抗和二抗重新配置。祝好运。
5楼2013-10-23 17:49:09
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