| 查看: 2632 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
看看咱这个电泳图，菜鸟根本不懂。。
|
||
|
普通凝胶电泳图，三个2000的mark，目的片段630左右，用的PCR引物GC-341f和907r，PCR条件为 94 ℃预变性 5min；接下来是 94 ℃变性 30 s，50 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 1 min，30 个循环；72 ℃延伸 10 min，最后 4 ℃保温。 PCR体系为50ul。引物浓度为0.4umol/L。其他的酶、dNTP、和镁离子都是买的混合好的。大家帮我看下我这个是怎么回事，我接下来想做DGGE。 问题1：这个电泳图胶有没有问题，出现这个样子是什么原因啊。 问题2：目的条带位置是对的，想知道后面那些东西是什么？ 问题3：接下来是要做DGGE的，这样有没有影响，是否需要重新进行PCR，重新进行的话应该如何调整。 希望大家可以指导我一下，师兄没有做的，独自摸索，望得到指导。问题可能有点菜，希望大家不要介意，耐心解答。  Image9.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有92人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
11楼2013-10-22 16:35:46
2楼2013-10-21 09:48:18
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhouyangjue: 金币+4 2013-10-21 11:52:54
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-23 16:09:00
zhouyangjue: 金币+4 2013-10-30 11:39:53
感谢参与，应助指数 +1
zhouyangjue: 金币+4 2013-10-21 11:52:54
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-23 16:09:00
zhouyangjue: 金币+4 2013-10-30 11:39:53
|
不能说帮助，只能是说尽我所能帮你看看~ 问题一、就结果而言，这个电泳图没有问题，因为你要的结果出来了630，你的目的条带很明显，出现这个样子的原因包括很多。结合问题二，原因可能是循环数过高，退火温度可能有点低，模板和引物的配比可能有点高等，详情可以搜索PCR扩增出现非特异性条带（杂带）的原因。 问题二、目的条带位置对的，后面的阴影是非特异性目的条带，也就是所谓的杂带。后面那个白色的拖带不是太影响。 问题三、就目的而言，可以做DGGE，但是可能效果不好，因为杂带的影响。会导致结果误差。建议优化下PCR实验条件，使得干菜那个图只有清晰的特异性条带，没有杂带和二聚体等其他的影响因素。这样做DGGE效果会最好。而且很容易得出你需要的实验结论。否则效果不好判别。 希望对你有帮助…… |
3楼2013-10-21 11:12:53
4楼2013-10-21 11:13:13