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fengbing1116

金虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒连接问题

我在做载体构建，PUC19上连了一个片段，精提质粒验证，PCR验证，双酶切验证都正确，为什么单酶切出现好几条带呢？注，单酶切在质粒上只有一个酶切位点。

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幸福就是一种心态~

1楼 2013-10-13 19:25:27

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fengbing1116

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引用回帖:

2楼: Originally posted by chaorenxmc at 2013-10-13 19:40:51
单酶切的图呢，跑胶用没有酶切的原质粒作对照了吗，有可能单酶切没切开

从左到右依次是（前八个泳道）没有酶切的PUC19-A、双酶切验证、双酶切验证、EcoR1单酶切验证、Kpn1单酶切验证、50000Marker、Ba条带，Kpn1单酶切验证和BamH1单酶切验证正确，约3100bp,可是最后一道Pst1单酶切切得条带比3100要高，请问是什么原因？不同酶单酶切同一个载体后不应该是同一个长度吗？注，所用酶在载体上只有一个酶切位点。