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southern blot 内切酶和探针设计
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忘忧草_
木虫
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专业: 植物化学保护
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southern blot 内切酶和探针设计
各位大仙:
最近在用southern验证某植物的目的基因在该植物中的拷贝数。内切酶是不是只要设计的能切除DNA而又不切探针多对应的那段DNA序列即可呢?
我看了类似的文献,把文中的序列下下来用软件分析了酶切位点,但是发现在探针所对应的序列位置也有内切酶的酶切位点,这是怎么回事啊?
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不将就
1楼
2013-10-11 14:23:29
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忘忧草_
木虫
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专业: 植物化学保护
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引用回帖:
4楼
:
Originally posted by
blackrose8089
at 2013-10-12 15:57:03
是的,理论上是这样,但杂交的过程会受到很多方面的影响,需优化杂交的条件啊等等...
恩 太感谢您了
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不将就
5楼
2013-10-13 08:58:24
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blackrose8089
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专业: 植物学研究的新技术、新方
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流
2013-10-11 14:54:02
忘忧草_: 金币+30,
★★★
很有帮助, 谢谢啦!
2013-10-12 08:57:35
是的,内切酶是要设计的能切除DNA而又不切探针对应的那段DNA序列即可,楼主可以多试几种酶,看哪个能切得好些,切的弥散即可
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jiayoubashaonian
2楼
2013-10-11 14:39:18
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blackrose8089
铁杆木虫
(职业作家)
引用回帖:
5楼
:
Originally posted by
忘忧草_
at 2013-10-13 08:58:24
恩 太感谢您了
...
6楼
2013-10-13 09:56:59
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Crescendo
铁杆木虫
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专业: 植物病理学
楼主你好!最近我打算做Southern blot,但有个问题不清楚向你求教。
就是探针引物扩增的片段是gDNA的还是cDNA的?就是探针引物是根据gDNA还是cDNA进行设计?
我看到很多文献是用CDNA为模板进行探针合成的,但我们确实用gDNA进行杂交的——这让我很费解。
非常感谢你的帮助!
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日拱一卒,功不唐捐
7楼
2014-08-29 14:27:21
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