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wangliually

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA提取时有RNA污染

我提取植物的DNA出现严重的RNA污染,这是为什么?我采用的是NY1485-4-2010的CTAB有机法,没有加RNA酶。请问RNA酶是必须加的吗?传统的酚氯仿方法中去除RNA的是哪一步?采用国标的方法如果不加RNA酶的话可否除去RNA污染?
DNA提取时有RNA污染
20131009有机法.JPG
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不加RNase的话样品里当然有RNA。一般是加在破碎前的缓冲液里。如果前期步骤中有用到蛋白酶K,可以在酚氯仿抽提后加。
4楼2013-10-11 14:45:34
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查看全部 24 个回答

xl_dut

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangliually: 金币+5, 有帮助 2013-10-11 21:35:57
加入适量的RNA酶,37℃消化30-45min就好了!
传统的碱裂解法提取DNA时也需要加入一定量的RNase的,虽然碱性条件下RNA会发生自动降解,但细胞内的RNA丰度较高,还是需要加入一定量的RNase的。试剂盒提供的方法一般是在溶液I中加入少量RNase,可以取得较好的去除RNA效果,也可以在提取的最后一步加入RNase。
一日之计在于昨天!
2楼2013-10-11 12:22:35
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淘淘279

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你的情况应该加Rna酶
传统的酚氯仿方法中去除RNA一般在前三个溶液里加入RNA酶。
我们一般在溶液一里面加入RNA酶。
你能做的永远不止这些!
3楼2013-10-11 13:38:28
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wangliually

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xl_dut at 2013-10-11 12:22:35
加入适量的RNA酶,37℃消化30-45min就好了!
传统的碱裂解法提取DNA时也需要加入一定量的RNase的,虽然碱性条件下RNA会发生自动降解,但细胞内的RNA丰度较高,还是需要加入一定量的RNase的。试剂盒提供的方法一般是 ...

那点样孔里亮是怎么回事呢?是蛋白质污染吗?
5楼2013-10-11 21:37:06
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