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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌发酵液离心后无法过膜 怎么办
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yuer_

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌发酵液离心后无法过膜 怎么办

真菌发酵液离心后无法过膜 怎么办？我做的是真菌的发酵，目标产物是直接分泌胞外的，查了相关文献也是离心后过0.45的膜后直接上的液相。
但是，我的发酵液十分黏稠 10000rpm离心15min后还是过不了膜，甚至稀释10倍后阻力还是很大。试过加乙醇、甲醇沉淀 蛋白多糖，但是处理后产物基本就检测不到了。求助各位大侠啊。。
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1楼 2013-10-05 16:47:39
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 编辑内容 2013-10-06 22:04
laozuzunzhe: 编辑内容 2013-10-06 22:08
laozuzunzhe: 编辑内容 2013-10-06 22:08
laozuzunzhe: 编辑内容 2013-10-06 22:09
乱码，已编辑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by laozuzunzhe on 2013-10-6 at 22:09 ]
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2楼2013-10-06 09:37:16
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奥特曼2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-10-06 22:00:33
我分离过真菌胞外产物，用的方法与你不同，你是直接对发酵液进行测定，我是将产物提取出来在进行分析，过程是这样的：发酵液加氢氧化钠调节pH至12.5，超声3min，10000 rpm高速离心，上清液用冰乙醇4摄氏度沉淀12h，底部沉淀物即为胞外产物，5000 rpm离心获得产物，冻干后保存干燥样品用于后续分析。不知对于你的菌株适用不适用。
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3楼2013-10-06 09:53:04
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felling_123

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-10-06 22:00:47
1,建议用1ml离心管离心，提高转速15000rpm，5min；
2，用一次性针头过滤器过滤（0.45um）
因为上液相的样品需要量少，以上可满足要求（一个过滤器至少可过滤10ml样品）。
祝好运。
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不进则退，时刻努力
4楼2013-10-06 15:39:21
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笨笨d
5楼2013-10-06 16:07:14
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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yuer_: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 恩 我的是250ml的摇瓶 回头试一下萃取 2013-10-07 18:17:49
你做的跟我做的基本一样，不同的是，我真菌发酵液都是120L，也是分离次级代谢产物，你的我估计是试管级吧，（因为是微生物板块 ，呵呵）看你的实验目标产物不是很明确，  我们的方法就是用乙酸乙酯与发酵液等体积萃取三次，将你的目标产物萃取到乙酸乙酯相里去，这样你就很容易将乙酸乙酯旋蒸蒸干，然后用甲醇或者乙腈溶解，然后过膜上液相呗。。。。多糖 蛋白质等大极性物质是不会萃取到有机相里的，希望可以帮到你。。。。。。。。。。。。。。。。。。
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6楼2013-10-07 16:32:52
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tiu007

银虫 (小有名气)
不知你发酵的产物是哪一类的？针对发酵液黏度很大不好离心的，问题，我建议用酸化处理，将发酵液调pH至2.5左右，再离心处理，你的问题应该能解决，只是不知道你的产物耐酸不？
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7楼2013-10-08 10:47:53
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zh1306l

铁杆木虫 (正式写手)
1.如果是检测发酵单位，可以加入容易溶解目标物的溶剂，或者调节PH等方法，一方面可以沉淀一些杂质，另一方面，可以改变发酵液状态，便于过滤；加入溶剂后，目标物沉淀下来，可以离心取沉淀物，再次加入水进行溶解、过滤，在检测单位。
2、发酵液量比较大的话，过滤时可以加入助滤剂，如珍珠岩、硅藻土等。
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8楼2013-10-09 14:23:39
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