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铜虫 (小有名气)

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专业: 生物物理化学

[求助] 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带已有1人参与

各位大神，小妹现在遇到一大难题。
我有一株野生菌产我要的酶，发酵后我对粗酶液进行了盐析和透析，然后过了强阴离子柱，再把洗脱的蛋白冻干后用tris复溶，浓度大约300微克/毫升。之后就想做一个SDS-PAGE看看蛋白纯不纯，还有它的分子量。
分离胶和浓缩胶分别是12%和5%，但是就是没有条带，可是Marker是有条带的。不知道是什么原因，跪求各位能够解答！！！！！！！

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1楼 2013-10-04 19:17:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

之子于归110

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by felling_123 at 2013-10-06 15:26:31
建议增加样品的浓度（该样品浓度的5~10倍），因为你的样品“300ug/ml“不一定是实际浓度，某些蛋白浓度测定方法对低浓度蛋白测定误差大，低浓度的样品是看不见条带的。祝你好运

你好，我做蛋白纯化用硫酸铵分级沉淀。百分之30的上清有酶活，沉淀没有。但是SDS上清液无条带，但是沉淀有明显条带

发自小木虫Android客户端