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xulong712711

铜虫 (初入文坛)

[求助] 考马斯亮蓝法具体步骤

考马斯亮蓝法具体步骤的说明书,英文也可以
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lifming

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2013-10-02 00:27:27
Bradford法测定蛋白质浓度
1.目的:
练习标准曲线的制作,比较不同pH值的蛋白质标准溶液对测定的影响。
2.试剂:
①显色剂:取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85%(w/v)磷酸,将溶液用水稀释到1000ml。
②BSA标准溶液(1000µg/ml),分别用0.01N盐酸,去离子水,0.01N NaOH溶液配制,4℃冰箱放置可保存一周。
3.设备与仪器:
微量移液器:一支用于专吸BSA;一支用于专吸dH2O
岛津UV-265紫外可见光分光光度计
4.操作程序:
试管号                  1        2        3        4        5        6
BSA(µl)          0        10        20        40        70        100
去离子水(µl)        100        90        80        60        30        0
显色剂(ml)        5        5        5        5        5        5
加显色剂混匀,静止2min后测定OD595,建立标准曲线
注:①显色液中G-250,出现沉淀不能用。
②定容BSA标准液时,混合次数,以保证混匀。
样品的加入同BSA的加入。如果OD太高,减少加入量
2楼2013-10-02 00:24:00
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