24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1172  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ashap

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 目的片段连表达载体

各位求助!!!
我的目的片段大小为2273bp,在连接pMD19T载体后摇菌酶切验证,切下边一条带,与表达载体(7800bp)连接,后可以长出菌来,但是单酶切验证时大小却在4000bp以上。
我都做了几次了,问了别人,说是可能是目的片段与T载体再次连接;我制了块长胶,跑到两条带分开,再切下边一条带,结果还是和原来一样。
目的片段连表达载体
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ashap

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-17 23:59:42
与表达载体相连后的单酶切确定没有问题吗?做了双酶切、其它酶切位点的单酶切及未经酶切的质粒对照了吗?此外,你的表达载体也是氨苄抗性的吗?如果不是,筛出来的不可能是与T载体相连的。

单酶切了,就是片段不大小不对。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-09-18 07:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

cicelyzh

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:05:38
与表达载体相连后的单酶切确定没有问题吗?做了双酶切、其它酶切位点的单酶切及未经酶切的质粒对照了吗?此外,你的表达载体也是氨苄抗性的吗?如果不是,筛出来的不可能是与T载体相连的。
2楼2013-09-17 23:59:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:05:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by ashap at 2013-09-18 07:17:10
单酶切了,就是片段不大小不对。
...

如果是这样,首先检查一下你回收的载体片段和目的片段是否正确。尤其是从T载体回收的片段是否正确,如果有引物,可以P一下。如果没有引物,看目的片段中间是否有特异的酶切位点。
4楼2013-09-19 00:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +8 李芷新1 2026-03-31 8/400 2026-04-01 01:39 by 1018329917
[考研] 一志愿:西北大学,英一数一408-284分求调剂 +7 12.27 2026-03-27 7/350 2026-03-31 21:59 by lbsjt
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +10 李李不服输 2026-03-25 10/500 2026-03-31 21:20 by yuq
[考研] 315求调剂 +6 akie... 2026-03-28 7/350 2026-03-31 16:48 by asdfzly
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +4 lmnlzy 2026-03-31 4/200 2026-03-31 15:25 by 西京学院招办
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 272求调剂,接受跨专业调剂! +3 闲鱼卢 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:00 by 替代品000
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 4/200 2026-03-31 10:20 by cal0306
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +6 星沉uu 2026-03-26 7/350 2026-03-31 10:19 by GdShizy
[考研] 282求调剂 +3 呼吸都是减肥 2026-03-31 3/150 2026-03-31 10:00 by wangjy2002
[考研] 英一数一408,总分284,二战真诚求调剂 +3 12.27 2026-03-30 5/250 2026-03-31 00:47 by 不吃芒果17
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +9 @taotao 2026-03-29 9/450 2026-03-30 22:29 by 我是小康
[考研] 281求调剂 +5 亚克西good 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:42 by dophin1985
[考研] 337求调剂 +6 《树》 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:15 by herarysara
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 339求调剂,想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
信息提示
请填处理意见