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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做过cDNA文库的同学进来看看，小弟有几个小问题想问一下
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15879003030

铜虫 (小有名气)

[求助] 做过cDNA文库的同学进来看看，小弟有几个小问题想问一下

本人要用clontech的634933试剂盒做cDNA文库。
说明书上最后一步只写到了扩增菌落的这一步，下一步没有写。我想问一下下一步是不是要大量抽大肠杆菌质粒？然后保存此质粒备用对吗？
是不是要用到质粒大提试剂盒呢？
有做过的同学出来交流一下经验吧~~谢谢啦
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1楼2013-09-17 18:11:45
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15879003030

铜虫 (小有名气)
没人做过吗？求回答~~
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2楼2013-09-17 20:13:30
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faggege

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-09-18 12:11:13
15879003030: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-18 19:35:07
以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
其实扩增的菌群就是文库了，后面要做的应该就是就是保存菌群了
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行动高于一切，努力造就未来，
3楼2013-09-18 12:06:28
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15879003030

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by faggege at 2013-09-18 12:06:28
以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的c ...

谢谢你~  还想问一下，我们想把这些有cDNA的质粒转到酵母里去，保存菌不是我们最终目的吧~  而且菌的保存应该不适合长期保存的，是应该扩大培养后抽总的质粒吗？
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4楼2013-09-18 16:15:49
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jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
15879003030: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-18 19:34:59
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-20 20:06:29
做Y2H？那就做质粒大抽，可以在大抽前存几毫升的扩增菌液保存然后剩下的大抽质粒保存使用
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5楼2013-09-18 17:00:53
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