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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞培养方面的问题，希望有高手能帮我一下
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小小星星

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细胞培养方面的问题，希望有高手能帮我一下

我打算养细胞，研究一种促进细胞生长的药物的不同的浓度对细胞的生长的促进效果。需要加入牛血清吗，加入牛血清里面就有生长因子，对实验有影响吗，还有一点就是加入了牛血清后培养基本身就是细胞的最佳生长环境了，再加入药物会不会没有效果，甚至反而会抑制细胞的生长呢？
      
希望高手能为我指导下，非常感谢
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1楼 2013-09-13 14:13:08
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始祖鸟

木虫 (著名写手)
楼主要样哪种细胞啊？
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7楼2013-10-15 19:39:15
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小小星星

铜虫 (初入文坛)
大家是觉得金币少了吗还是怎么回事啊，我是新手，不知道情况，现在很急，求帮助
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-13 14:42:39
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-09-14 07:03:27
1.平时培养时一般5%~10%的小牛血清（细胞不同，差异很大，有些需要胎牛血清，有些血清需要15%到20%），维持细胞增长，传代。2.传代贴壁后养至50%~70%（不同细胞可能到80%），换无血清培养基（细胞太脆弱就加1%或2%的小牛血清），给药，培养24h（时间自己定，不同细胞不同）测MTT。就OK了。需要摸条件，就是空白细胞不死但生长缓慢的血清浓度。
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3楼2013-09-13 14:49:19
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毕业你好

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 鼓励新虫发帖，尤其是应助 2013-09-14 07:03:57
我给楼上补充几点：
【还有一点就是加入了牛血清后培养基本身就是细胞的最佳生长环境了，再加入药物会不会没有效果，甚至反而会抑制细胞的生长呢？】
细胞培养完换无血清培养基，一般细胞状态比较好的话不用再加牛血清，不过，即便加入，问题也不大，也是能够看出药物对细胞的促进影响的，不会出现抑制作用，倒是有可能会出现OD值偏高。

测药物促进细胞增殖有好几种方法，我简单介绍一下：
1.比色法：也是现在最常用的方法，包括较早使用的MTT、XTT，性价比非常高，MTT也是国内唯一认可的方法，但近几年因为实验要求的提升，MTT越来越不适合现在去发论文，或者做研究，复孔差异大，灵敏度低，细胞毒性大等劣势非常明显，后来就有了MTS、CCK-8，都是非常好的测细胞增殖的方法，而且使用96孔板酶标仪测，效率很高。
2.H3渗入法：同位素法，是现在最准确的测细胞增殖的方法，没有之一，直接标记DNA，准确表达传代结果，缺点也比较明显，是强烈的细胞毒性，用完基本细胞全死了，而且同位素对人体也有一定致癌性，所以使用范围不广。
3.Glo：是一种新型的荧光法，通过染色ATP从而表现细胞增殖情况，细胞越多，ATP越多，那么荧光强度就越明显，非常准确，而且十分迅速，平均10分钟就能测得结果，缺点是成本高，一个样的成本是CCK-8的两倍之多，而且保存条件严格，必须-20°冷冻保存。
4.细胞仪检测：仪器直接读数细胞数量，很准确，缺点是仪器比较贵，耗时。
5.A Blue：也是一种测细胞增殖活力的方法，不过暂时不是很了解，楼主可以百度一下。

希望可以帮到你！
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4楼2013-09-13 15:57:42
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